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货号 | FS-X10218 |
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中文名称:Ac-YVAD-FMK(caspase 4 抑制剂)
英文名称:Caspase 4 Inhibitors Z-VAD-FMK
产品规格:20μl
货号:FS-X10218
产品介绍:
英文名称:Caspase 4 Inhibitors Z-VAD-FMK 产品规格:20μl 浓度:5mM in DMSO 分子式:C21H28FN3O7 分子量:453.5 含量:77~97%(TLC) 纯度:≥92%(HPLC) 储存:-20℃,有效期6个月 |
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
蕈状芽孢杆菌胰高血糖样肽-1抗体Human Syntaxin 6 大鼠基质金属蛋白7(MMP-7)免疫试剂盒
苏云金芽孢杆菌颗粒蛋白前体抗体Human TADA2B 大鼠基质金属蛋白5(MMP-5)免疫试剂盒
硬结节杆菌磷脂酰基蛋白聚糖1抗体Human STX1A(Syntaxin-1A) 大鼠基质金属蛋白4(MMP-4)免疫试剂盒
鞘菌糖原合激3α抗体Human TADA2L 大鼠基质金属蛋白3(MMP-3)免疫试剂盒
*灰葡萄孢庆大霉单克抗体Human TADA3L 大鼠基质金属蛋白2/明胶A(MMP-2/Gelatinase A)免疫试剂盒
粪肠球菌硫转移ω1抗体Human TAF1L 大鼠基质金属蛋白14(MMP-14)免疫试剂盒
毛霉属间隙连接蛋白31抗体Human TAF1 大鼠基质金属蛋白13(MMP-13)免疫试剂盒
弓形虫(GJS-3株)甘-N-甲基转移Human TAF3 大鼠基质金属蛋白10(MMP-10)免疫试剂盒
北京掷孢酵母G蛋白偶联受体75抗体Human TAF7 大鼠基质金属蛋白1(MMP-1/Collagenase I)免疫试剂盒
盖替隐球酵母GATA结合蛋白4抗体Human TAF6L 大鼠肌质网膜钙ATP(SERCA)免疫试剂盒
浅灰小双孢菌兔抗γ1基丁抗体Human TAF5L 大鼠肌激同工MM(CK-MM)免疫试剂盒
广西腐霉G蛋白偶联受体GPR85蛋白抗体Human DNASE1(Deoxyribonuclease-1) 大鼠肌激同工MB(CK-MB)免疫试剂盒
黑曲霉庆大霉抗体Human TAF9(Transcription initiation factor TFIID subunit 9) 大鼠肌激同工BB(CK-BB)免疫试剂盒
空肠弯曲杆菌半乳糖凝集9抗体Human TAF9B 大鼠肌球蛋白(MYS)免疫试剂盒
缘毛壳促代谢型谷受体2+4抗体Human Syntaxin 10 大鼠肌红蛋白(MYO/MB)免疫试剂盒
鞘杆菌GPNMB抗体Human STX1A(Syntaxin-1A) 大鼠肌酐(Cr)免疫试剂盒
小单孢菌属Micromonospora│sp. 质量规格:分析标准品,99%黄杞
天麻萌发菌Mycena│sp. 质量规格:分析标准品,≥99.5%(GC)晶兰
猪呼吸与繁殖障碍综合征病毒Arterivirus│Porcine respiratory and reproductive syndrome virus 质量规格:分析标准品8-O-乙酰山栀酯
Ac-YVAD-FMK(caspase 4 抑制剂)橙色单胞 1,1-环烷二甲果糖
粪产碱杆* 2-环己基-2-羟基硫化氢
旱生红曲霉 4-乙氧羰基苯抗肽LL-37
空肠弯曲杆 2,2,2-三氟乙基对甲苯磺酯血管紧张II
荧光假单胞杆 6-(5--2-吡啶基)-5H-吡咯并[3,4-b]吡-5,7(6H)-二酮过氧化物
大肠埃希 支原体
金针菇—金白1号 4,6-二-5-硝基嘧啶泰泽病原体
Actinomadura amylolytica 1,1-二溴-3,3,3-三氟酮弓形虫
糙皮侧耳 2-酰噻唑呼肠弧病3
小麦苍白杆 叔丁氧羰基氨氧基乙肝炎病
栗疫 1-丁基-2-甲基肺炎病
腐生葡萄球 4--6-甲氧基喹啉鼠痘病
豇豆慢生根瘤 2-溴-4甲基苄细小病
大肠埃希氏 1-庚烷蛋白质羰基
耶尔森氏 3,4-噻吩二羧8-异构前列腺
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