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Z-LETD-FMK(Caspase 8 抑制剂)

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所  在  地上海市

更新时间:2022-05-18 10:05:15浏览次数:147次

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货号 FS-X10220
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产品介绍:

英文名称:Caspase 8 Inhibitors Ac-IETD-FMK

产品规格:20μl

浓度:5mM in DMSO

分子式:C30H44FN4O11

分子量:655.7

纯度:≥95% (TLC)

储存:-20℃,有效期6个月

中文名称:Z-LETD-FMK(Caspase 8 抑制剂)

英文名称:Caspase 8 Inhibitors Ac-IETD-FMK

产品规格:20μl

货号:FS-X10220

实验报告:

一、分离与培养:

1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;

2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;

3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;

5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;

二、免疫荧光鉴定:

1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;

2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;

5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;

6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。

8、结果分析

a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)

培养操作步骤:

1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;

2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);

3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;

4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;

5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

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细极链格孢Alternaria│tenuissima 质量规格:1000μg/ml,溶剂:川续断皂乙

木霉Trichoderma│sp. 质量规格:1000μg/ml,基体:1.0mol/L HNO3京尼平

柠檬色赤杆菌Erythrobacter│citreus 质量规格:standard for GC特女贞
Z-LETD-FMK(Caspase 8 抑制剂)卷枝毛霉 2-氨基-4-基吡啶Ca2+ATP

酿酒酵母 2-乙基-N-TNFSF14

运动节杆 2-氨基-5-基吡啶过氧化物

发酵性酵母 N-甲基-3-苯基-3-羟基钙调磷

盐水球 3--4-甲氧基苄盐盐Slingshot同源物

唐菖蒲青霉 乙基乙炔钙调蛋白依赖性蛋白激激

发根根瘤 4-溴甲酯钙调蛋白依赖性蛋白激1D

毛栓孔 S-Boc-2-巯基-4,6-二甲基嘧啶钙调依赖蛋白激II

盘长孢* 2-溴-4,6-二单丝蛋白激1

库氏类芽孢杆 1-甲酰基-3-甲磺酰基-2-咪唑烷酮钙调依赖蛋白激IV

鳞盖红菇 2,5-二甲基噻唑组蛋白去乙酰化

有柄灵芝 2-溴-5-甲基噻唑前列腺A1

普通链孢囊 2-甲基-4-基噻吩II型胶原

根瘤 苯并呋喃-2-甲γ-氨基丁运载蛋白1

厚垣孢普可尼亚 1-甲基-4-咪唑甲内皮转化2

 


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