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货号 | FS-X10220 |
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产品介绍:
英文名称:Caspase 8 Inhibitors Ac-IETD-FMK 产品规格:20μl 浓度:5mM in DMSO 分子式:C30H44FN4O11 分子量:655.7 纯度:≥95% (TLC) 储存:-20℃,有效期6个月 |
中文名称:Z-LETD-FMK(Caspase 8 抑制剂)
英文名称:Caspase 8 Inhibitors Ac-IETD-FMK
产品规格:20μl
货号:FS-X10220
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
醋杆菌科乙酰肝2抗体Human SGPP1(Sphingosine-1-phosphate phosphatase 1) 大鼠花生四烯5脂氧合(Alox5)免疫试剂盒
弯孢菌人血清抗体Human Synaptotagmin-11 大鼠花生四烯12-脂氧合,白型(Alox12l/Alox12/Alox15)免疫试剂盒
粉红单端孢血红氧合 1/热休克蛋白32抗体Human SYTL2 大鼠花生四烯(AA)免疫试剂盒
纹孢青霉磷化HER3受体抗体Human TACC1 大鼠红生成受体(EPOR)免疫试剂盒
绳状青霉磷化组蛋白去乙酰化4/5/7抗体Human C4B(Complement C4-B) 大鼠红生成(EPO)免疫试剂盒
传染性法氏囊病病异染色质蛋白1-γ抗体Human TACC3 大鼠横纹肌辅肌动蛋白α (sm Actinin-α )免疫试剂盒
发酵乳杆菌组蛋白H1抗体Human TACC2 大鼠黑色抗体(MC Ab)免疫试剂盒
纽缠丛梗孢组蛋白去乙酰化1抗体Human Syntaxin 3 大鼠核因子-κB亚基p65亲和肽(NF-κB p65)免疫试剂盒
孟氏假单胞菌HAUS3蛋白抗体Human Syntaxin 2 大鼠核因子κB(NF-κB)免疫试剂盒
假单胞菌属热休克蛋白93抗体Human SYN1 大鼠和肽(copeptin)免疫试剂盒
松生拟层孔菌磷化组蛋白去乙酰化3抗体Human SYN2 大鼠含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪激2(Tie-2)免疫试剂盒
苏云金芽孢杆菌组蛋白H2B抗体Human SYNGAP1 大鼠含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪激1(Tie-1)免疫试剂盒
运动发酵单胞菌运动亚种短链L-3羟烷基脱氢抗体Human SYNJ1 大鼠过氧化脂质/乳过氧化物(LPO)免疫试剂盒
诺卡氏菌属组蛋白去乙酰化9抗体Human Synaptogyrin-4 大鼠过氧化物体增殖因子活化受体γ( PPAR-γ)免疫试剂盒
黄单胞菌组蛋白去乙酰化10抗体Human Synaptogyrin 1 大鼠过氧化物体增殖物激活受体β(PPAR-B/PPARD)免疫试剂盒
嗜热脂肪地球芽胞杆菌HOXB4抗体Human Synaptojanin 2 大鼠过氧化物体增殖物激活受体α(PPAR-α)免疫试剂盒
细极链格孢Alternaria│tenuissima 质量规格:1000μg/ml,溶剂:川续断皂乙
木霉Trichoderma│sp. 质量规格:1000μg/ml,基体:1.0mol/L HNO3京尼平
柠檬色赤杆菌Erythrobacter│citreus 质量规格:standard for GC特女贞
Z-LETD-FMK(Caspase 8 抑制剂)卷枝毛霉 2-氨基-4-基吡啶Ca2+ATP
酿酒酵母 2-乙基-N-TNFSF14
运动节杆 2-氨基-5-基吡啶过氧化物
发酵性酵母 N-甲基-3-苯基-3-羟基钙调磷
盐水球 3--4-甲氧基苄盐盐Slingshot同源物
唐菖蒲青霉 乙基乙炔钙调蛋白依赖性蛋白激激
发根根瘤 4-溴甲酯钙调蛋白依赖性蛋白激1D
毛栓孔 S-Boc-2-巯基-4,6-二甲基嘧啶钙调依赖蛋白激II
盘长孢* 2-溴-4,6-二单丝蛋白激1
库氏类芽孢杆 1-甲酰基-3-甲磺酰基-2-咪唑烷酮钙调依赖蛋白激IV
鳞盖红菇 2,5-二甲基噻唑组蛋白去乙酰化
有柄灵芝 2-溴-5-甲基噻唑前列腺A1
普通链孢囊 2-甲基-4-基噻吩II型胶原
根瘤 苯并呋喃-2-甲γ-氨基丁运载蛋白1
厚垣孢普可尼亚 1-甲基-4-咪唑甲内皮转化2
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