Ac-AEVD-FMK(caspase 10 抑制剂)-上海抚生实业有限公司

货号	FS-X10222

培养操作步骤：

1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

中文名称：Ac-AEVD-FMK(caspase 10 抑制剂)

英文名称：Caspase 10 Inhibitors Z-AEVD-FMK

产品规格：20μl

货号：FS-X10222

产品介绍:

英文名称：Caspase 10 Inhibitors Z-AEVD-FMK

产品规格：20μl

：1135688-47-9

浓度：5mM in DMSO

分子式：C28H39FN4O10

分子量：610.6

纯度：≥95%

储存：-20℃，有效期24个月

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

污胶鼓菌人乙型肝炎表面抗原单克抗体（检测）Human STOML1 大鼠骨织(Ostn)免疫试剂盒

白色沉积物杆菌人乙型肝炎e抗原单克（包被）抗体Human STK4 大鼠骨粘连蛋白(ON)免疫试剂盒

根瘤菌人乙型肝炎e抗原单克（检测）抗体Human STOM(Stomatin) 大鼠骨形态形成蛋白拮抗蛋白免疫试剂盒

拜氏醋杆状菌小鼠抗人血红蛋白单克抗体Human STK16 大鼠骨形成蛋白6(BMP-6)免疫试剂盒

贝伦格葡萄座腔菌梨生专化型甲型流感病血凝抗体Human STXBP3 大鼠骨特异性碱性磷B(ALP-B)免疫试剂盒

淡紫青霉磷化HER2受体抗体Human SULT1C2 大鼠骨特性碱性磷C端肽免疫试剂盒

谷棒杆菌Ⅰ型组蛋白去乙酰化4抗体Human SULT2B1 大鼠骨桥(OPN)免疫试剂盒

假单胞菌属磷化HER2受体抗体Human SULT2A1 大鼠骨碱性磷(BALP)免疫试剂盒

茎点霉属磷化组蛋白去乙酰化8抗体Human SULT4A1 大鼠骨钙(OT)免疫试剂盒

黄柄鸡油菌HLA-DR抗体Human SUMF2 大鼠骨成型蛋白受体Ⅱ(BMPR-Ⅱ)免疫试剂盒

枯草芽孢杆菌人类白抗原G抗体Human SUMF1 大鼠骨成型蛋白受体1A(BMPR-1A)免疫试剂盒

枯草芽孢杆菌高迁移率族蛋白A2抗体Human TBXAS1(Thromboxane-A synthase) 大鼠骨成型蛋白7(BMP-7)免疫试剂盒

丁香直丝链霉菌高迁移率族蛋白B1抗体Human SUCLA2 大鼠骨成型蛋白4(BMP-4)免疫试剂盒

交链孢菌血红氧合2抗体Human SUCLG2 大鼠骨成型蛋白3(BMP-3)免疫试剂盒

白金针21HOXc8抗体Human SUCLG1 大鼠骨成型蛋白2(BMP-2)免疫试剂盒

漏斗状侧耳（凤尾菇）原癌基因H-ras抗体Human ARG1(Arginase-1) 大鼠骨保护(OPG)免疫试剂盒

核桃黄极毛杆菌Xanthomonas│campestris pvar. juglandis (Pammel) Dowson 质量规格：standard for GC,≥99.5%(GC)杨梅

土生类诺卡氏菌Nocardioides│terrigena 质量规格：Standard for GC,≥99.95%(GC)氧化槐果碱

大肠埃希氏菌DH5α/pcDNA-Gag-NC-C15S/C18SEscherichia│coli 质量规格：Standard for GC,≥99.5%(GC)莪术二
Ac-AEVD-FMK(caspase 10 抑制剂)香菇对甲苯磺酐精脱羧

雪白根霉 1-(2-)哌盐盐羧酯

柯达酵母属 6,7-二甲氧基-1-苯基-1,2,3,4-四氢异喹啉溶血磷脂

紫杉木齿 8-羟基久洛尼定抗C二型胶原抗体

pet-21a 7-溴-1-庚烯Ⅱ型胶原抗体

立枯丝核 BOC-L-4-氟苯正丁

溶血葡萄球肼乙酯2丁酮

酿酒酵母喹啉-6-甲脱氧核糖核Ⅰ

链格孢属 5-甲基吡-2-羧甲酯谷氨酰基环化

ATCC 35030 (R)-2-氧代四-3-基苄酯apelin-12

酿酒酵母 N-Boc-L-高丝NADPH氧化

球黑孢 3-(2-乙基)-2-甲基-4H-吡啶并[1,2-a]嘧啶-4-酮维生K

盘长孢状盘孢 2,4-二甲氧基苯甲多巴转运蛋白

沙漠类芽胞杆 4-甲氧基乙酰乙甲酯多巴D2

居泉沙雷氏 1,2,3,4-四氢异喹啉-1-羧γ氨基丁A型受体
操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)