Ac-LEED-FMK(caspase 13 抑制剂)-上海抚生实业有限公司

货号	FS-X10223

培养操作步骤：

1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

中文名称：Ac-LEED-FMK(caspase 13 抑制剂)

英文名称：Caspase 13 Inhibitors Z-AEVD-FMK

产品规格：20μl

货号：FS-X10223

产品介绍:

英文名称：Caspase 13 Inhibitors Z-AEVD-FMK

产品规格：20μl

浓度：2mM in DMSO

分子式：C32H45FN4O12

分子量：696.7

纯度：≥95%(HPLC)

储存：-20℃，有效期12个月

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

假单胞菌热休克蛋白-60抗体Human SUMO2/3 大鼠还原(GR)免疫试剂盒

洋葱伯克霍尔德氏菌热休克蛋白-70抗体Human SUN1 大鼠过氧化物(GSH-PX)免疫试剂盒

不等弯孢热休克蛋白90α抗体Human SUOX 大鼠S转移θ1(GSTT1)免疫试剂盒

根瘤菌热休克蛋白90β/HSP90 β 抗体Human SYCE1 大鼠S转移P(GSTP1)免疫试剂盒

蔷薇放线孢*人巨病UL23抗体Human STT3A 大鼠S转移Mu1(GSTM1)免疫试剂盒

顶孢头孢霉HECA蛋白抗体Human SUPT16H 大鼠S转移(GSTs)免疫试剂盒

香菇异质核糖核蛋白hnRNPA2抗体Human STT3B 大鼠(GSH)免疫试剂盒

齐藤假丝酵母异质核糖核蛋白U抗体Human STXBP2 大鼠谷酰合成(GLUL)免疫试剂盒

巨大芽胞杆菌人类状瘤病16/18 E6抗体Human STXBP1(Syntaxin-binding protein 1) 大鼠谷酰(Gln)免疫试剂盒

木贼镰孢HA tag标签抗体Human STXBP3 大鼠谷脱羧自身抗体IgM(GAD-Ab-IgM)免疫试剂盒

克雷伯氏菌属荷尔蒙敏感脂肪抗体Human STXBP4 大鼠谷脱羧自身抗体IgG(GAD-Ab-IgG)免疫试剂盒

大肠菌群质控样品血红蛋白α1/α-Globin抗体Human IFI6(Interferon alpha-inducible protein 6) 大鼠谷脱羧1(GAD1)免疫试剂盒

德尔布有孢酵母Fas相互作用蛋白激2抗体Human STXBP5 大鼠谷脱氢(GDH/GLDH)免疫试剂盒

葡萄座腔菌Fas相互作用蛋白激3抗体Human STOML2(Stomatin-like protein 2) 大鼠谷免疫试剂盒

乳乳球菌乳亚种人类疱疹病8抗体Human STXBP6 大鼠孤腓肽(OFQ/N)免疫试剂盒

根瘤菌磷化热休克蛋白27抗体Human SUFU 大鼠钩端螺旋体IgG(Leptospira IgG)免疫试剂盒

传染性法氏囊病病毒Avibirnavirus│Infectious bursal disease virus 质量规格：standard for GC,≥99.6%(GC)朝藿定A1

小单孢菌属Micromonospora│sp. 质量规格：Standard for GC, ≥99.5% (GC)黄柏碱

盐栖盐田菌Salinicola│salarius 质量规格：standard for GC,≥99.0%(GC)京尼平
Ac-LEED-FMK(caspase 13 抑制剂)薄黑孔 2-溴-1-（3-）乙酮谷脱羧65

酿酒酵母 2,3-二甲氧基苯谷脱羧67

酿酒酵母 3,5,6-三水杨多巴D2受体

平菇 3--2-丁酮tcf-4抗体

绳状青霉二氟草锂谷氨酰酰肽环转移

浅黄隐球酵母 4-溴-3-盐盐蛋白质氧化羰基化

居真细 3-基-4-氟三氟甲苯泰泽病原体抗体

烬灰产色链霉 N-乙基-2-甲基弓形虫抗体

丛毛单胞化N-辛基吡啶SYA674型四环

中国台湾根霉 (S)-(-)-alpha-(Boc-氨基)-gamma-丁内酯球蛋白G3亚型抗体

密歇根棍状杆标记亚种磷甲型肝炎病抗体

大肠埃希 4-溴-3-氟苯甲音猬因子

板栗蛇孢日规壳 2-甲氧基吡啶-4-频哪酯谷氨酰

间型假丝酵母 4-甲基-5-羟基呋喃-2-酮磷肌3激

扩展青霉改名娄地青霉 5-甲基四氮唑Dectin-1蛋白
操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)