20S蛋白酶体抑制剂(MG-132)-上海抚生实业有限公司

货号	FS-X10232

培养操作步骤：

1．公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出，用无菌丝绸布擦拭干净，不要用纱布；

2．将盖玻片轻轻放入6孔培养板（每孔一片）或培养皿中（每个平皿可放置2-3片）；

3．在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时；

4．将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中，使盖玻片*浸在培养液中；

5．将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时，将培养板取出，用盖片镊轻轻取出盖玻片，用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。

中文名称：20S蛋白酶体抑制剂(MG-132)

英文名称：20S proteasome inhibitor

产品规格：5mg|10mg|50mg|100mg

货号：FS-X10232

产品介绍:

英文名称：20S proteasome inhibitor

产品规格：5mg|10mg|50mg|100mg

MG-132是一种有效的非特异性的20S蛋白酶体(20S proteasome)抑制剂，作用于β5蛋白酶样(β5chymotrypsin)活性位点，IC50为24.2nM。

注：本品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他用途！

号：133407-82-6

纯度：98.0%

分子量：475.62

MG-132结构式

储存条件：-20℃避光，有效期2年，溶入溶剂后-20℃请尽量在一个月内使用。

实验报告：

一、分离与培养：

1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织，然后用PBS将此组织块清洗2次，最后将组织剪成1mm3左右大小；

2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；

3、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；

4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液，1200r/min 离心10min，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；

5、差速贴壁1h后，吸出培养基，按实验需要接种于6孔板中继续培养；

二、免疫荧光鉴定：

1、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min；

2、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min；

4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；

5、PBS冲洗细胞3次，每次10min，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗， 37℃条件下放置1h；

6、用PBS冲洗3次，每次10min，最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。

大肠埃希氏菌艾滋病病抗体Human SPANXE 大鼠雌三(E3)免疫试剂盒

杆状毛霉结合珠蛋白相关蛋白抗体Human SPA17 大鼠雌激硫转移(SULT1E1)免疫试剂盒

杂色曲霉L-组脱羧抗体Human SLC29A1(EquilibRative nucleoside transporter 1) 大鼠雌激(E)免疫试剂盒

马克斯克鲁维酵母乙型肝炎病X蛋白相互作用蛋白Human Spartin/SPG20 大鼠雌二受体(ER)免疫试剂盒

鞘盒菌属组蛋白H2B.s抗体Human SPACA3 大鼠雌二(E2)抗体免疫试剂盒

产气肠杆菌组蛋白去乙酰化4+5+9抗体Human SPAM1 大鼠雌二(E2)免疫试剂盒

假单胞菌属热休克蛋白27相关蛋白1抗体Human SPACA1 大鼠垂草扁桃(VMA)免疫试剂盒

马阔里类芽孢杆菌卟胆原脱抗体Human SPAG11A 大鼠穿孔/成孔蛋白(PF/PFP)免疫试剂盒

球孢白僵菌异质核糖核蛋白U2样蛋白抗体Human SPANXA2/SPANXA1 大鼠成纤维生长因子9(FGF9)免疫试剂盒

枯草芽孢杆菌肝癌衍生生长因子2抗体Human SPANXB1 大鼠成纤维生长因子8(FGF8)免疫试剂盒

球孢链霉菌肝癌相关抗原57抗体Human SPANXC 大鼠成纤维生长因子23(FGF-23)免疫试剂盒

平菇补体C3抗体Human SP6 大鼠成纤维生长因子13(FGF-13)免疫试剂盒

玫烟色棒束孢甲型流感病血凝抗体Human SPA17 大鼠成纤维生长因子10(FGF10)免疫试剂盒

污黑腐皮壳甲状旁腺功能亢进蛋白2/分裂周期73抗体Human SPANXE 大鼠巢蛋白(NID)免疫试剂盒

热带假丝酵母线粒体丝蛋白抗体Human Spartin/SPG20 大鼠超氧化物歧化1,可溶性(SOD1)免疫试剂盒

大西洋鲁杰氏菌/钠超化激活环核门控通道蛋白2抗体Human SLC29A1(EquilibRative nucleoside transporter 1) 大鼠超氧化物歧化[锰],线粒体(SOD2)免疫试剂盒

血红栓菌Trametes│sanguinea 质量规格：分析标准品紫菀

沉积物海源菌Idiomarina│sediminum 质量规格：分析标准品,>99%(GC）白鲜碱

大肠埃希氏菌DH5α/pBH10-P(-)vif(-)Escherichia│coli 质量规格：分析标准品q
20S蛋白酶体抑制剂(MG-132)植物乳杆 3-硝基-4-白介8

枯草芽孢杆 2-戊基呋喃维生B2

无 1-苄基-2-苯基咪唑α

豇豆慢生根瘤 3-苄氧基P糖蛋白;渗透性糖蛋白

孢吸水链霉 3,5-吡唑羧二乙酯仙台病抗体

黑曲霉 R-3-甲乙酯盐盐15脂加氧

大肠埃希氏 (1R,2S)-2-(3,4-二氟苯基)环 (R)-扁桃盐调节性T

大肠埃希氏杆 3-吡咯烷酮盐盐氨基转移

路氏乳杆 4--6-三氟甲基嘧啶谷草转氨;天门冬氨基转移

黄微绿链霉 5-溴-2-氟-6-血小板内皮粘附因子

Micrococcus yunnanensis 4-癸基苯抗猪圆环2型病抗体

灰黄链霉 2,4-二羟基-6-尿型血浆原激活物

叶点霉 1-苄基-4-甲基哌盐盐百日咳

胶孢 2-甲基喹啉盐盐百日咳IgG抗体

Microbacterium terricola 4-甲苯基三氟超氧化物歧化2
操作规程

1、在96孔板加入细胞100μL/孔，通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞，细胞毒性实验每孔加入100微升5000～10000个细胞（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定）。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.

2、.加入适当浓度的0～10μL 受试化合物。

3、将96孔板在37℃，含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。

4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小时，使MTT 还原为甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板摇床摇匀。

7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度（如无570nm 滤光片，可以使用560-600nm 的滤光片）。

8、结果分析

a、细胞的存活率：将各测试孔的OD 值减去本底OD 值（*培养基加MTT，无细胞）或空白药物孔OD 值（*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT，无细胞），各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示，T 为加药细胞的OD 值，C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =（加药细胞OD/对照细胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)