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货号 | FS-X10233 |
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产品介绍:
英文名称:Wortmannin 产品规格:0.5mg :19545-26-7 分子量:428.43 储存:-20℃,有效期12个月。 别名:KY 12420 描述:Wortmannin 是PI3K 抑制剂,IC50为3nM,抑制自噬体的形成,也有效抑制DNA-PK/ATM,IC50分别为16nM 和150nM. |
中文名称:Wortmannin(PI3K抑制剂)
英文名称:Wortmannin
产品规格:0.5mg
货号:FS-X10233
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)
培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
滑菇热休克蛋白β7抗体Human SPACA1 大鼠超敏热休克蛋白70(HSP-70)免疫试剂盒
缺陷短波单胞菌/钠超化激活环核门控通道蛋白3抗体Human SPDYA 大鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)免疫试剂盒
毛木耳铁调节蛋白25抗体Human SPHK1 大鼠肠脂肪结合蛋白(iFABP)免疫试剂盒
大肠杆菌HD域内含蛋白2抗体Human CADM3(Cell adhesion molecule 3) 大鼠叉头框蛋白P3(FoxP3)免疫试剂盒
聚生壳菌艾滋病病p55抗体Human SPHK1-Phospho-Ser225 大鼠层粘连蛋白亚基γ-2(LAMC2)免疫试剂盒
芽孢杆菌造血激抗体Human SPHK2 大鼠层粘蛋白α1(LAMA1)免疫试剂盒
禾生HEAT重复内含蛋白5B蛋白抗体Human SPI1 大鼠层连蛋白/板层(LN)免疫试剂盒
紧密帚枝霉缺氧诱导基因1B蛋白抗体Human SPATA1 大鼠不对称二甲基精(ADMA)免疫试剂盒
三叶草根瘤菌乙酰化组蛋白H4抗体Human SPATA13 大鼠补体因子H(CFH)免疫试剂盒
酿酒酵母热休克蛋白B2抗体Human SPATA16 大鼠补体因子D(adipsin)(CFD)免疫试剂盒
根瘤菌人类白抗原B27Human SPAG4 大鼠补体片断5a(C5a)免疫试剂盒
草地阿格雷氏菌螺旋环螺旋转录因子HATH6抗体Human SOX5 大鼠补体片断5(C5)免疫试剂盒
孢淡灰链霉菌神经调节蛋白1β2抗体Human SOX6( SRY-box 6) 大鼠补体片断3a(C3a)免疫试剂盒
尖孢镰刀菌HDHD3蛋白抗体Human SOX8 大鼠补体片断3(C3)免疫试剂盒
平田头菇7-2HEATR3蛋白抗体Human SOX7 大鼠补体蛋白4(C4)免疫试剂盒
肉葡萄球菌(可订)癌增强蛋白抗体Human SP100 大鼠补体蛋白3(C3)免疫试剂盒
鲁氏不动杆菌Acinetobacter│lwoffii 质量规格:分析标准品,≥99.5%(GC)格列风内酯
丛毛红曲菌Monascus│pilosus 质量规格:分析标准品紫草
莫格球拟酵母Torulopsis│mogii 质量规格:分析标准品,≥98.5%(GC)菝葜皂元
Wortmannin(PI3K抑制剂)黄孢紫红菇 4-氟-3-基苯尼克酰磷核糖转移
齐藤隐球酵母 三吡啶钠环氧二十碳三烯
寡氧单胞 1,1,1-三氟异C1q肿瘤坏死因子相关蛋白4
蜡样芽孢杆 三氟化-甲溶液KI67抗原
金针菇F39 3-吡啶去乙酰化
根瘤 偏磷异柠檬脱氢2
红色盐颗粒形 环戊烷四羧巨病IgG抗体
篱边粘褶 3-氨基-4,4,4-三氟巴豆乙酯白血病抑制因子
松鼠葡萄球松鼠亚种 2-氨基嘧啶盐盐赖氢吡啶啉
酮丁梭(酮丁杆) 盐黄酮哌酯17α羟化
酿酒酵母 3,5-二-4-氨基苯乙酮20α羟化
黄绿木霉 5-(磺酰基)-2-氟P21蛋白
苏云金芽孢杆 2-甲基丁酯胆固24S-羟化
蝙蝠蛾拟青霉 Cbz-L-谷 1-苄酯CD47分子
5#---3号(梨形灰包) 4-三氟甲硫基-1,2-苯二肌糖
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