大鼠冠状动脉成纤维细胞 返回列表页

使用方法：

收到细胞后，请按照以下方法进行操作。

1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。

2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。

3. 细胞传代

1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；

2) 添加0.125%消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入*培养液终止消化；

3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的*培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；

4) 待细胞*贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。

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商品介绍：

培养操作：

1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；

1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

SUPT16H/CDC68  染色体特异性转录延伸因子抗体 规格: 0.2mlHIF-1 Alpha  缺氧诱导因子1α 抗体HIF-1α 规格: 0.1ml

phospho-DES (Thr76/Thr77)  磷化结抗体 规格: 0.1ml

ASB9  含锚重复序列-细胞因子信号抑制物盒家族9抗体 规格: 0.2ml

Goat Anti-human IgM  羊抗人IgM 规格: 1mg

phospho-TCF3/E2A/E47(Ser39)  磷化转录因子3抗体 0.1mlCXCL16  CXC趋化

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霉菌培养基进口、国产Mould Medium用于生物制品霉菌无菌试验（GB标准）250山羊促肾上腺皮质激素释放因子(CRF)免疫试剂盒进口、分装

营养琼脂（NA）  进口、国产Nutrient Agar细菌总数测定，细菌传代培养250山羊促肾上腺皮质激素(ACTH)免疫试剂盒现货供应

四号琼脂基础     进口、国产No.4 Agar Base用于霍乱弧菌的选择性分离，后加亚碲酸钾250山羊促卵泡素(FSH)免疫试剂盒*直销

SS 琼脂     进口、国产Salmonella-Shigella Agar选择性培养基，用于沙门氏菌，志贺氏菌的选择性分离250山羊促甲状腺素(TSH)免疫试剂盒进口、组装

伊红美蓝琼脂（EMB）   进口、国产Eosin-Methylene Blue Agar弱选择性培养基，用于肠道菌的选择性分离250山羊雌激素(E)免疫试剂盒进口、分装

三糖铁琼脂（TSI）   进口、国产Triple Sugar Iron Agar用于肠杆菌科细菌的生化反应筛选（葡萄糖，乳糖，蔗糖）250山羊雌二醇(E2)免疫试剂盒现货供应

XLD 琼脂      进口、国产Xylose Lysine Desoxycholate Agar选择性培养基，用于志贺氏菌的选择性培养(FDA标准)250山羊超氧化物歧化2，线粒体(SOD2)免疫试剂盒*直销

MH 肉汤（MHB）   进口、国产Mueller-Hinton Broth用于抗生素敏感试验250山羊超氧化物歧化1,可溶性(SOD1)免疫试剂盒进口、组装