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货号 | GOY-01X1332 |
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产品名称 | 大鼠胚胎肝母细胞 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
分类 | 原代细胞 |
货号 | GOY-01X1332 |
商品介绍:
名称 大鼠胚胎肝母细胞 2.组织来源:胚胎;肝脏 3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介: 大鼠胚胎肝母细胞分离自胚胎肝组织;肝脏是身体内以代谢功能为主的一个器官,并在身体里面起着去氧化、储存肝糖、分泌性蛋白质的合成等作用;肝脏也制造消化系统中之胆汁。肝脏是机体内脏里最大的器官,位于机体中的腹部位置,在右侧横隔膜之下,位于胆囊之前端且于右边肾脏的前方,胃的上方。肝脏是机体消化系统中最大的消化腺,为一红棕色的V字形器官。肝脏是尿素合成的主要器官,又是新陈代谢的重要器官。肝脏起源于腹侧前肠内胚层细胞(一种多潜能干细胞)。在 ED8.5 的小鼠和 ED9.5 的大鼠,前肠的原始上皮细胞接触心肌中胚层后快速增殖,形成肝原基。大约1d后,原始上皮细胞侵入原始横膈,继续分化为幼稚肝脏上皮细胞,这些细胞先表达 AFP 然后是ALb。幼稚肝脏上皮细胞很快成熟,并进一步分化为肝细胞或胆管上皮细胞,因为此期的肝脏上皮细胞其具有向这两种肝实质细胞双向分化的潜能,所以又称肝母细胞。 5.方法简介: ()实验室分离的大鼠胚胎肝母细胞采用胶原酶消化法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测: ()实验室分离的大鼠胚胎肝母细胞经PCK免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息: 包被条件鼠尾胶原Ⅰ(2-5μg/cm2) 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-R224 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态上皮细胞样 传代特性可传2-3代左右 消化液0.25% 培养条件气相:空气,95%;CO2,5% |
使用方法:
收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜,以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2) 添加0.125%消化液约1mL至培养瓶中,37℃温浴3min左右;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后吸弃消化液,再加入*培养液终止消化;
3) 用吸管轻轻吹打混匀,按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代,然后补充新鲜的*培养基至5mL,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中培养;
4) 待细胞*贴壁后,培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
2 ug pCMV-VSV-G pCMV-VSV-G 低温运输,-20℃保存
肉汤基础 Lysozyme Broth Base 250g
2 ug pCMV6 entry pCMV6 entry 低温运输,-20℃保存
50T 山羊关节炎脑炎病毒PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存
5 mg Nocodazole (有丝分裂抑制剂) Cell Apoptosis Inducer and Inhibitor -20℃保存
250mL FCS Blocking Buffer in PBS FCS B
大鼠胚胎肝母细胞双岐杆菌生化用基础培养基 英文名称:The Biochemical Basis of Bifidobacterium Medium 产品规格:250g 小鼠抗子宫内膜抗体(EMAb)免疫试剂盒进口、组装
双歧杆菌培养基 英文名称:Bifidobacterium Medium 产品规格:250g 小鼠抗中性粒细胞核周抗体(pANCA)免疫试剂盒进口、分装
TPY肉汤 英文名称:TPY Broth 产品规格:250g 小鼠抗中性粒/中心体抗体(ACA)免疫试剂盒现货供应
TPY液体培养基 英文名称:TPY Fliud Medium 产品规格:250g 小鼠抗增殖细胞核抗原抗体(PCNA)免疫试剂盒*直销
BCG牛乳培养基 英文名称:BCG Milk Medium 产品规格:250g 小鼠抗胰蛋白(AT)免疫试剂盒进口、组装
乳酸杆菌琼脂培养基 英文名称:Lactobacillus Agar Medium 产品规格:250g 小鼠抗血小板抗体IgG/M/A(PA-IgG/M/A)免疫试剂盒进口、分装
乳酸杆菌糖发酵培养基 英文名称:Lactobacillus Carbohydrate Fermentation Medium 产品规格:250g 小鼠抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)免疫试剂盒现货供应
BBL液体培养基 英文名称:BBL Liquid Medium 产品规格:250g 小鼠抗心磷脂抗体IgG(ACA-IgG)免疫试剂盒*直销
酸化MRS琼脂(AMRSA) 英文名称:Acidification MRS Agar 产品规格:250g 小鼠抗心磷脂抗体IgA(ACA-IgA)免疫试剂盒进口、组装
GYP白亚琼脂培养基 英文名称:GYP Medium 产品规格:250g 小鼠抗心肌抗体(AMA)免疫试剂盒进口、分装
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