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大鼠子宫内膜基质细胞

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更新时间:2022-05-23 14:39:05浏览次数:130次

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产品名称

大鼠子宫内膜基质细胞

规格

5×10⁵Cells/T25培养瓶

分类

原代细胞

货号

GOY-01X1362

商品介绍:

名称 大鼠子宫内膜基质细胞

2.组织来源:子宫组织

3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介:

大鼠子宫内膜基质细胞分离自子宫组织;子宫是孕育胎儿的器官,位于盆腔中部,膀胱与直肠之间,其位置可随膀胱与直肠的充盈程度或体位而有变化。子宫的正常位置主要依靠子宫诸韧带、盆膈、尿生殖膈及会阴中心腱等结构维持,这些结构受损或松弛时,可以引起子宫脱垂。子宫内膜即黏膜,由上皮(属单层柱状上皮,有分泌细胞和纤毛细胞二种)和固有膜(由结缔组织构成,其内有大量的星形细胞,称为基质细胞)组成,子宫内膜可分为浅表的功能膜和深部的基底层,功能层较厚,约占内膜厚度的4/5;基底层较薄较致密,约占1/5,功能层可剥脱,而基底层不可剥脱。子宫内膜上皮细胞主要功能:子宫内膜亦称子宫黏膜,是指构成哺乳类子宫内壁的一层;子宫内膜对动情素和孕激素都起反应,因此可随着性周期(发情周期、月经周期)发生显著的变化。子宫内膜与胚胎附植密切相关,在生殖生理的研究中占重要地位。在胚胎与母体对话"的过程中,子宫内膜上皮细胞充当了极其重要的角色。子宫内膜构成雌性哺乳动物子宫壁的最内层,位于子宫腔面,在动物生殖生理活动中占有重要地位。子宫和子宫内膜是维持雌性动物生理功能和生育能力的重要器官,子宫内膜的再生修复是子宫的重要生理功能。体外培养的子宫内膜上皮细胞对于研究其生理功能、药物作用以及各种致病因素作用下的病理生理改变具重要意义。

5.方法简介:

()实验室分离的大鼠子宫内膜基质细胞采用胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。

6.质量检测:

()实验室分离的大鼠子宫内膜基质细胞Vimentin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1HBVHCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息:

培养基含FBS、生长添加剂、PenicillinStreptomycin

产品货号CM-R235

换液频率每2-3天换液一次

生长特性贴壁

细胞形态成纤维细胞样

传代特性可传3代左右

消化液0.25%

培养条件气相:空气,95%CO25%

使用方法:

收到细胞后,请按照以下方法进行操作。

1. 取出25cm2培养瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜,以稳定细胞状态。

2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。

3. 细胞传代

1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;

2) 添加0.125%消化液约1mL至培养瓶中,37℃温浴3min左右;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后吸弃消化液,再加入*培养液终止消化;

3) 用吸管轻轻吹打混匀,按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代,然后补充新鲜的*培养基至5mL,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中培养;

4) 待细胞*贴壁后,培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。

 

培养操作:

1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。

2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。

1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。

3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。

4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。

3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;

1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。

2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。

3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
图片13.jpg

细胞培养操作规程:

一.培养基及培养冻存条件准备:

1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。

2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。

3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。

二.细胞处理:

1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:

方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

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