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货号 | GOY-01X1408 |
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产品名称 | 小鼠胚胎干细胞 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
分类 | 原代细胞 |
货号 | GOY-01X1408 |
商品介绍:
名称 小鼠胚胎干细胞 2.组织来源:囊胚 3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介: 小鼠胚胎干细胞分离自囊胚胚胎组织;胚胎干细胞(Embryonic stem cell,ESCs,简称ES、EK或ESC细胞)是早期胚胎(原肠胚期之前)或原始性腺中分离出来的一类细胞,它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。无论在体外还是体内环境,ES细胞都能被诱导分化为机体几乎所有的细胞类型。进一步说,胚胎干细胞(ES细胞)是一种高度未分化细胞。它具有发育的全能性,能分化出成体动物的所有组织和器官,包括生殖细胞。ES细胞具有与早期胚胎细胞相似的形态结构,细胞核大,有一个或几个核仁,胞核中多为常染色质,胞质胞浆少,结构简单。体外培养时,细胞排列紧密,呈集落状生长。用碱性磷酸酶染色,ES细胞呈棕红色,而周围的成纤维细胞呈淡黄色。细胞克隆和周围存在明显界限,形成的克隆细胞彼此界限不清,细胞表面有折光较强的脂状小滴。细胞克隆形态多样,多数呈岛状或巢状。小鼠ES细胞的直径7 微米~18 微米,猪、牛、羊ES细胞的颜色较深,直径12 微米~18 微米。胚胎干细胞与普通细胞有显著差别,有其特定的生长特性和特定的标志,例如碱性磷酸酶活性非常高,带有胚胎阶段特异性表面抗原( Stage- specific embryonic antigens,SSEA),人类胚胎干细胞还带有高分子量的糖蛋白TRA1-60、TRA-1-81等标志,这些特性和标志均可以用于对胚胎干细胞进行鉴定,除此之外,胚胎干细胞还可以在体外传代,并保持正常核型。在体外培养体系中加入分化抑制剂如白血病抑制因子( Leukaemia inhibitory factor,LF)或者在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层(MEF)上培养时,胚胎干细胞都能呈克隆性增殖,长期保持核型正常和稳定,冻存解冻也不影响不分化的特性。另外,胚胎干细胞还表现岀高水平端粒酶活性,目前证明端粒酶与细胞衰老密切相关,多数成熟细胞的端粒酶活性都很低。这些都是胚胎干细胞与成熟细胞不同的重要特点,也可能是其复制生命期限远比体细胞长的原因。 5.方法简介: ()实验室分离的小鼠胚胎干细胞采用分离囊胚组织,去除胚胎透明带、使用特制专用培养基筛选培养,消化传代纯化制备而来,细胞总量约为5×105cells/瓶。 6.质量检测: ()实验室分离的小鼠胚胎干细胞经Oct-4免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息: 包被条件明胶(0.1%) 培养基含LIF、BMP、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-M314 换液频率每2-3天换液一次; 生长特性贴壁 细胞形态短梭形、多角形 传代特性可传5-8代左右 消化液0.025% 培养条件气相:空气,95%;CO2,5% |
使用方法:
收到细胞后,请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶,75%酒精消毒,拆下封口膜,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜,以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2) 添加0.125%消化液约1mL至培养瓶中,37℃温浴3min左右;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后吸弃消化液,再加入*培养液终止消化;
3) 用吸管轻轻吹打混匀,按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代,然后补充新鲜的*培养基至5mL,放入37℃,5% CO2细胞培养箱中培养;
4) 待细胞*贴壁后,培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml ,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
主动脉内皮细胞 1×106 5×106
主动脉平滑肌细胞 1×106 5×106
大隐静脉平滑肌细胞 1×106 5×106
冠状动脉平滑肌细胞 1×106 5×106
淋巴管内皮细胞 1×106 5×106
淋巴管成纤维细胞 1×106 5×106
外周血白细胞 1×106 5×106
颌下腺上皮细胞 1×106 5×106
腮腺细胞 1×106 5×106
食管上皮细胞 1×106 5×106
食管平滑肌细胞 1×106 5×106
胃粘膜上皮细胞 1×106 5×106
肠平滑肌细胞 1×106 5
小鼠胚胎干细胞BGS 琼脂进口、国产BGS Agar用于沙门氏菌的分离培养(USDA-FSIS方法)250兔子S100B蛋白(S-100B)免疫试剂盒现货供应
碱性蛋白胨水 进口、国产Alkaline Peptone Water用于霍乱弧菌选择性增菌培养(SN标准)250兔子L选择素(L-Selectin)免疫试剂盒*直销
TCBS琼脂 进口、国产Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar用于致病性弧菌的选择性分离(GB、SN标准)250兔子E选择素(E-Selectin/CD62E)免疫试剂盒进口、组装
氯化钠B肉汤基础(SCPB) 进口、国产Sodium Chloride Polymyxin Broth Base用于副溶血性弧菌选择性增菌培养,用前应无菌加入B(SN标准)250兔子D-乳酸 免疫试剂盒进口、分装
B 进口、国产添加于100mlHB4131中2.5万单位/支*5兔子D二聚体(D2D)免疫试剂盒现货供应
精双水解试验用培养基(AD)进口、国产生化培养基,用于弧菌的精试验5兔子Dickkopf 1(DKK1)免疫试剂盒*直销
庆大琼脂 进口、国产Gentamycin Agar用于霍乱弧菌选择性分离培养250兔子C反应蛋白(CRP)免疫试剂盒进口、组装
四号琼脂基础 进口、国产No.4 Agar Base用于霍乱弧菌选择性分离培养,灭菌冷至50℃加入亚碲酸钾,倒平板250兔子CD34分子(CD34)免疫试剂盒进口、分装
我妻氏培养基基础 进口、国产Wagstsuma Agar Base用于神奈川现象试验(SN标准)250兔子B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)免疫试剂盒现货供应
60%/L氯化钠蛋白胨肉汤 进口、国产60%/L NaCl Peptone Water用于副溶血性弧菌的前增菌培养250兔子8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)免疫试剂盒*直销
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