影响人正常组织细胞因子检测准确度和特异性的因素分析

影响人正常组织细胞因子检测准确度和特异性的因素有:(1)抗体:单抗的表位识别;(2)细胞因子:多种分子形式，结合蛋白复合物、抑制剂和可溶性受体复合物;(3)血浆基质:干扰抗体，异嗜性抗体和类风湿因子;(4)标准:重组参考物质可能不显示与样品平行的剂量———反应曲线。

细胞因子结合蛋白 已知IL-1β、TNF-α和IL-6能结合从细胞进入血浆的可溶性受体或特异的拮抗剂。免疫分析法是否能识别这样的结合形式几乎是未知的，但是对TNF的研究得出了一些重要结论。但使用竞争性免疫分析法时，癌症病人与败血症病人的TNF-α是可被检测的。而ELISA法由于不能测定TNF-α与P 55 TNF受体的结合物而无法测定癌症病人血浆中的TNF-α。

血浆中包含几种形式的IL-6分子，它们与一些抗血清的作用较弱，缺乏生物学活性并与其它血浆蛋白质以及IL-6的可溶性受体组成复合物。已知IL-6免疫分析法和生物分析测定其在正常血清中的浓度为0或在10～75ng/L范围，败血症病人的IL-6浓度升高到1～2μg/L，脑膜炎病人的IL-6浓度升到200μg/L。然而，May等说明大多数的检测方法仅仅测定了低分子量的IL-6，他们采用能识别IL-6高分子量的单抗，测得在正常血清中IL-6的浓度为1～10μg/L，并且在1例骨髓移植后病人的血清样品中，测得IL-6的浓度为5～10mg/L。

多种分子的形式 一些人正常组织细胞因子的多种分子形式已被充分认识，但是其对细胞因子测定影响的重要性并未得到*的研究。IL-6是一个的例子，它由一个位于第7染色体上，包含5个外显子的单一多杰基因编码。其氨基酸序列包括几个潜在的O-糖基位点，2个N-糖基位点和几个丝氨酸磷酸化位点。由细菌产生的重组IL-6的相对分子量为21Kd。人成纤维细胞至少分泌6种形式，相对分子量为23～30Kd的IL-6，它们均是糖蛋白，能在败血症病人的血浆中被检测。人内皮细胞分泌一种分子量为45Kd的IL-6，它似乎是血浆中的IL-6的主要存在形式。

人血浆中的干扰物质 血浆中通常包含有与IgG反应的抗体。这些异嗜性的抗体可影响夹心免疫分析法，它们在俘获抗体和被标记的抗体间形成桥梁，而错误地导致高分析值。研究表明，15%～40%的病人样本中含有能够干扰检测的抗体。异嗜性抗体能与鼠、兔和牛血清免疫球蛋白发生反应，在大多数情况下，它们与牛IgG的结合Z强。在检测中，加入正常的非免疫动物血清吸附异嗜性抗体，常能够消除这种形式的干扰。

类风湿因子是IgM的自身抗体 Hamilton等的研究说明，IgM类风湿因子与鼠IgG的结合发生于1%的健康献血者和31%的类风湿关节炎病人。然而，也有研究表明，在9.1%的正常献血者中发生了这类结合。这些抗体可造成与异嗜性抗体*相同的影响，并且他们在对人正常组织细胞因子检测具有特别意义的类风湿病患者中的浓度*。