转基因品系玉米MS 3 LAMP试剂盒 返回列表页

实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
参数规格：

产品名称：转基因品系玉米MS 3 LAMP试剂盒
货号:CP97657
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
运输：低温
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
使用方法:
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。

以下是转基因品系玉米MS 3 LAMP试剂盒公司正在热销的产品：
luminol分子式：C8H7N3O2分子量：177.16

3-氨基邻二酰肼，发光氨A15

4--7-硝基-2,1,3-并氧杂恶二唑   10199-89-0

4-Chloro-7-nitro-1,2,3-benzoxadiazole分子式：C6H2CLN3O3分子量：199.55

4--7-呋咱；NBD-CL

4--7-硝基-2,1,3-并氧杂恶二唑   10199-89-0

4-Chloro-7-nitro-1,2,3-benzoxadiazole分子式：C6H2CLN3O3分子量：199.55

4--7-呋咱；NBD-CL

4-肼基-7-硝基-2,1,3-并氧杂恶二唑   90421-78-6

NBD hydrazine分子式：C6H7N5O3N分子量：195.14

NBD联氨

250mLMaleate Buffer（马来酸缓冲液）,0.2M,pH7.0 Maleate Buffer,0.2M,pH7.0 常温保存

50mLManganese Chloride Solution（锰溶液）,1M Manganese Chloride Solution,1M 常温保存

50mLManganese Sulfate Solution（酸锰溶液）,0.5M Manganese Sulfate Solution,0.5M 常温保存

500mLMcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH2.5 Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH2.5 常温保存

500mLMcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH3.0 Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH3.0 常温保存

500mLMcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH3.5 Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH3.5 常温保存

500mLMcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH4.0 Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH4.0 常温保存

500mLMcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH4.5 Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH4.5 常温保存

500mLMcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH5.0 Mcilvaine Buffer (Citrate Phosphate Buffer),0.2M,pH5.0 常温保存
转基因品系玉米MS 3 LAMP试剂盒双调蛋白(AREG)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　   规格：　48T/96T

Monkey interferon alpha (IFN- alpha) ELISA Kit ,别名: 猴α干扰素(IFN-α)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

猴γ干扰素(IFN-γ)elisa试剂盒 英文名称： Monkey interferon gamma (IFN- gamma) ELISA Kit ,别名: 猴γ干扰素(IFN-γ)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

小鼠血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)elisa试剂盒 英文名称： Mouse platelet derived growth factor AB (PDGF-AB) ELISA Kit ,别名: 小鼠血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

猴白介素6(IL-6)elisa试剂盒 英文名称： Monkey interleukin 6 (IL-6) ELISA Kit ,别名: 猴白介素6(IL-6)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

小鼠血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)elisa试剂盒 英文名称： Mouse platelet derived growth factor BB (PDGF-BB) ELISA Kit ,别名: 小鼠血小板衍生生长因子BB(PDGF-BB)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

猴超敏C反应蛋白(hs-CRP)elisa试剂盒 英文名称： Monkey high sensitive C reactive protein (hs-CRP) ELISA Kit ,别名: 猴超敏C反应蛋白(hs-CRP)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

小鼠血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)elisa试剂盒 英文名称： Mouse platelet derived growth factor soluble receptor alpha (PDGFsR- alpha) ELISA Kit ,别名: 小鼠血小板衍生生长因子可溶性受体α(PDGFsR-α)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

猴抗肝细胞膜抗体(LMA)elisa试剂盒 英文名称： Monkey anti liver cell membrane antibody (LMA) ELISA Kit ,别名: 猴抗肝细胞膜抗体(LMA)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

小鼠血小板因子3(PF-3)elisa试剂盒 英文名称： Mouse platelet factor 3 (PF-3) ELISA Kit ,别名: 小鼠血小板因子3(PF-3)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

小鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)elisa试剂盒 英文名称： Mouse platelet factor 4 (PF-4/CXCL4) ELISA Kit ,别名: 小鼠血小板因子4(PF-4/CXCL4)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

小鼠烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)elisa试剂盒 英文名称： Mouse nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH) ELISA Kit ,别名: 小鼠烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

猴可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)elisa试剂盒 英文名称： Monkey soluble vascular cell adhesion molecule 1 (sVCAM-1) ELISA Kit ,别名: 猴可溶性血管细胞粘附分子1(sVCAM-1)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

小鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)elisa试剂盒 英文名称： Mouse oxidized low density lipoprotein (OxLDL) ELISA Kit ,别名: 小鼠氧化低密度脂蛋白(OxLDL)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

猴胰岛素(INS)elisa试剂盒 英文名称：