人卵巢成纤维细胞提取物说明 返回列表页

细胞处理：
1） 复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2） 细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

人卵巢成纤维细胞提取物【Human Ovary : Normal Ovarian Firbroblast Derivatives】人卵巢成纤维细胞提取物是从人卵巢成纤维细胞提取的，人卵巢成纤维细胞从正常人卵巢组织制备。正常人卵巢组织采集自各地方医院，采集工作根据IRB 和 HIPAA批准的方案进行。所有的产品在发货之前均经过严格的QA/QC流程以确保其质量。这些产品可以直接用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。

总RNA制备：利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol试剂分离RNA，然后用Qiagen RNA Clean Kit进行纯化。提供的总RNA样品附有RNA样品总浓度、总含量、电泳照片、OD值测定结果等。

cDNA制备：纯化后的总RNA来合成cDNA第一链，以50ul总反应体系进行逆转录，体系中包括MMLV反转录酶和随机引物以及10mg总RNA。68℃反应10min 后终止RT反应。利用1x RT Buffer 运输cDNA，1 ul cDNA 足够做一次PCR反应。所有cDNA产品在订单发货之前都经过了严格的QA/QC分析，保证了产品的质量。

蛋白制备：利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制备人关节软骨组织裂解液，离心去除组织碎片，通过Bio-Rad蛋白检测试剂盒测定蛋白浓度，组织蛋白稀释后用非还原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巯基乙醇及PMSF，-80度保存。

潜在的应用： <1>已知基因的PCR克隆；<2>mRNA选择性剪接；<3>基因克隆与目标测序；<4> Western and Northern Blot；<5>蛋白检测与蛋白质组学；<6>芯片研究与表达图谱。该细胞只可用于科研，不得用于临床应用。
对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：
1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2.加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。
3.按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。
4.将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
细胞处理方法：
以下细胞处理方法及细胞说明书仅供参考，具体操作还需要根据到货时细胞密度，细胞生长状态等具体情况，酌情处理，如需要更详细技术指导，请及时电话或邮件联系。
一．贴壁细胞
客户接收到细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。
肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。
显微镜观察细胞，当细胞融汇至80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。
严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。
用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。
1000rpm,5min离心，重悬细胞。换新的细胞培养瓶，37℃,5%CO2  培养。
二．悬浮细胞
1. 接收到细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。
2. 肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X ,200X 各一张）。
3. 严格无菌操作，打开细胞培养瓶。
4. 将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出（严禁直接倾倒）。
5. 1000rpm,5min离心，重悬细胞。 换新的细胞培养瓶和新鲜培养基，37℃,5%CO2  培养细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
方法二：可选择半数换液方式，弃去半数培养基后，将剩余细胞悬起，将细胞悬液按1：2到1：3的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。悬浮细胞冻存时，应将细胞收集，1000RPM，常温条件下离心5分钟，少量保存上清液（防止细胞吸走），加入部分新鲜培养基，吹打均匀后，加入到冻存管中，在冻存管中加入10%DMSO摇匀后进行冻存。
116700-36-8  H-9 dihydrochloride  25mg  Marek's Disease Virus(MDV)马立克氏病病毒2型探针法荧光定量PCR试剂盒 

116700-36-8  H-9 dihydrochloride  50mg  Marek's Disease Virus(MDV)马立克氏病病毒2型探针法荧光定量PCR试剂盒 

116700-36-8  H-9 dihydrochloride  5mg  Marek's Disease Virus(MDV)马立克氏病病毒3型探针法荧光定量PCR试剂盒 

116714-46-6  Novaluron  100mg  Marek's Disease Virus(MDV)马立克氏病病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 

116714-46-6  Novaluron  10mM*1mLinDMSO  Marek's Disease Virus(MDV)马立克氏病病毒1型探针法荧光定量PCR试剂盒
CL-0022AGS(胃腺癌细胞)5×106cells/瓶×2双[4-(2-羟乙氧基)苯基]砜(>97.0%(GC))Bis[4-(2-hydroxyethoxy)phenyl] Sulfone质量规格：>97.0%(GC)

SF9, 昆虫卵巢细胞二苯砜-3,3'-二磺酸二钠盐(>95.0%(T))Diphenylsulfone-3,3'-disulfonic Acid Di Salt质量规格：>95.0%(T)

EB病毒转化的B细胞;KM9402 大隐静脉内皮细胞*培养基 100mL5,10-二氢-5,10-二甲基吩嗪(>98.0%(GC)(N))5,10-Dihydro-5,10-dimethylphenazine质量规格：>98.0%(GC)(N)

间充质干细胞生长添加物-无动物成分MSCGS-acf双(羰基二硫代)四硫富瓦1(>95.0%(W))Bis(carbonyldithio)tetrathiafulvalene质量规格：>95.0%(W)

CDH2 Others Mouse 小鼠 N-Cadherin / CD325 / CDH2 细胞裂解液 (阳性对照) 1,2-苯二硫醇(>95.0%(GC))1,2-Benzenedithiol质量规格：>95.0%(GC)
人卵巢成纤维细胞提取物说明PTPN11 Others Mouse 小鼠 SHP2 / PTPN11 细胞裂解液 (阳性对照) MK-2866质量规格：>99%Ostarine,GTx-024

成纤维细胞*培养基 100mLXTT钠盐质量规格：>90%,进分XTT  salt

PA317细胞，逆转录病毒包装用的胚胎成纤维细胞 小肠结肠炎耶尔森氏菌 豚鼠肺细胞;GP-F1二氢猕猴桃内酯,奇异果内酯(标准品)质量规格：HPLC>98%,标准品(2,6,6-Trimethyl-2-hydroxycyclohexylidene)acetic acid lactone

CCL17 Protein Cynomolgus 重组食蟹猴 CCL17 / TARC 蛋白 (His 标签)二氢猕猴桃内酯,奇异果内酯质量规格：>99%,AR(2,6,6-Trimethyl-2-hydroxycyclohexylidene)acetic acid lactone

NG108-15(小鼠神经细胞瘤与大鼠神经胶质瘤之融合细胞) 5×106cells/瓶×2  FAM20B / Gxk1 细胞裂解液 (阳性对照) 乳清酸质量规格：>98%(T),BROrotic acid
我公司提供原代细胞、细胞系、细胞株和菌种，细胞库管理规范，提供的细胞株背景清楚，提供参考文献和*培养条件。纯度可达 90%以上，且不含有 HIV-1、 HBV、 HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。