转基因构建35S启动子-hsp增强子LAMP试剂盒 返回列表页

使用方法:
一、稀释标准曲线样品（以 10E2-10E7 拷贝/μL 这 6 个 10 倍稀释度为例）。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。
1. 标记 6 个离心管，分别为 7，6，5，4，3，2。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 荧光 PCR 模板稀释液，*用带芯枪头，下同）。
3. 在 7 号管中加入 5 μL 阳性对照（浓度为 1×10E8 拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E7 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
4. 换枪头，在 6 号管中加入 5 μL 1×10E7 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E6 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
5. 换枪头，在 5 号管中加入 5 μL 1×10E6 拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 1×10E5 拷贝/μL 的标准曲线样品。放冰上待用。
6. 重复上面的操作直到得到 6 个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品 DNA 的制备
7. 用自选方法纯化样品的 DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
8. 如果有 N 个样品，则需要进行 N+2 个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。
三、设置 qPCR 反应（20μL 体系，在样品制备室进行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重复，则标记 N+9 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），6 个用于标准曲线。如果做定性分析，并且只做 1 次重复，则标记 N+4 个 PCR 管，其中 N+2 个用于上步得到的 N+2 个样品，1 个用于 PCR 阴性对照（用水做模板），1 个用于PCR 阳性对照。
参数规格：

产品名称：转基因构建35S启动子-hsp增强子LAMP试剂盒
货号:CP97699
产品规格：50T
产品运输：低温运输
产品保存：-20℃保存
产品有效期：一年
运输：低温
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

PCR检测方法包括以下步骤：
(1)将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线；
(2)待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中步骤(1)为：将参照基因与待测目的基因片段等比例连接，克隆到同一个质粒载体上，构建一种可同时用于参照基因以及待测目的基因扩增检测的标准品，并将所得标准品按照浓度梯度稀释后同时用于绘制参照基因以及待测目的基因的标准曲线。
其中所述参照基因为本领域常规参照基因，较佳地管家基因，优选地为RPPH1的扩增区域，其中所述质粒载体为本领域常规质粒载体，较佳地为PCR克隆载体，优选地为TA cloning载体，所述TA cloning载体较佳地为pMD18-T载体。其中所述标准品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例较佳地为1：1。由于标准品中待测目的基因与参照基因的比例为1:1，解决了目前相对标准曲线法应用中目的基因与参照基因的浓度比例关系难以控制的问题，提高HER2基因扩增检测的可靠性。
步骤(2)为：待测样本与步骤(1)所述标准品经同步进行实时荧光定量PCR扩增后，目的基因与参照基因按照各自的标准曲线计算各自的拷贝数，计算待测样本的目的基因与参照基因拷贝数比值，即得目的基因的拷贝数相对定量检测结果。
其中所述待测目的基因为本领域常规待测目的基因，较佳地为肿瘤或者疾病的特异性基因，更佳地为HER2基因的扩增区域，所述荧光定量PCR扩增为本领域常规荧光定量PCR扩增方法，所述荧光定量PCR扩增方法较佳地为多通道荧光定量PCR扩增，更佳地为双通道荧光定量PCR扩增。
​实验方法步骤：
方法
1：在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。     
10×PCR buffer                   
5 μl     dNTP mix （2mM）             
4 μl     引物1（10pM）                 
2 μl     引物2（10pM）                 
2 μl     Taq酶 （2U/μl）               
1 μl     DNA模板（50ng-1μg/μl）  
1 μl      加ddH2O至 50 μl  
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2：调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，在72℃ 保温7min。
3：结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4：PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μl进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。

以下是转基因构建35S启动子-hsp增强子LAMP试剂盒公司正在热销的产品：
EDDAB

十二烷基二基乙基溴化铵   68207-00-1

Dodecylethyldimethylammonium bromide分子式：C16H36BRN分子量：322.37

EDDAB

十烷基三化铵   2082-84-0

Decyltrimethylammonium bromide分子式：C13H30BRN分子量：280.29

(1-癸基)三化铵

十烷基三化铵   2082-84-0

Decyltrimethylammonium bromide分子式：C13H30BRN分子量：280.29

(1-癸基)三化铵

十烷基三化铵   2082-84-0

1000mLTBE Running Buffer,10XTBE Running Buffer,10X常温保存

25mLTBE Sample Buffer,6X TBE Sample Buffer,6X 常温保存

10mLTBE Urea Sample Buffer,2X TBE Urea Sample Buffer,2X 常温保存

1000mLTBE,10XTBE,10X常温保存

2000mLTBE,5XTBE,5X常温保存

1000mLTBS-EDTA Solution,10X TBS-EDTA Solution,10X 常温保存

500mLTBS-Tween-20 (TTBS),10XTBS-Tween-20 (TTBS),10X常温保存

500mLTBS-Tween-20 (TTBS),10X,in Classical TBS) TBS-Tween-20 (TTBS),10X,in Classical TBS) 常温保存

1000mLTBS-Tween-20 (TTBS),20X  TBS-Tween-20 (TTBS),20X  常温保存
转基因构建35S启动子-hsp增强子LAMP试剂盒生长分化因子5(GDF5)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法)　   规格：　48T/96T

英文名称： Rat CXC chemokine ligand 16 (CXCL16) ELISA Kit ,别名: 大鼠CXC趋化因子配体16(CXCL16)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

大鼠CXC趋化因子受体3(CXCR3)elisa试剂盒 英文名称： Rat CXC chemokine receptor 3 (CXCR3) ELISA Kit ,别名: 大鼠CXC趋化因子受体3(CXCR3)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

人Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNT)elisa试剂盒 英文名称： People aminoterminal propeptide of type III procollagen (P III NT) ELISA Kit ,别名: 人Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNT)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

大鼠C反应蛋白(CRP)elisa试剂盒 英文名称： Rat C reactive protein (CRP) ELISA Kit ,别名: 大鼠C反应蛋白(CRP)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

人Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)elisa试剂盒 英文名称： Human type III procollagen (P III NP) ELISA Kit ,别名: 人Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

大鼠C肽(C-Peptide)elisa试剂盒 英文名称： Rat C peptide (C-Peptide) ELISA Kit ,别名: 大鼠C肽(C-Peptide)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

大鼠C型钠尿肽(CNP)elisa试剂盒 英文名称： Rat C type natriuretic peptide (CNP) ELISA Kit ,别名: 大鼠C型钠尿肽(CNP)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

大鼠E钙黏蛋白/上皮钙黏蛋白(E-Cad)elisa试剂盒 英文名称： Rat E cadherin / epithelial cadherin (E-Cad) ELISA Kit ,别名: 大鼠E钙黏蛋白/上皮钙黏蛋白(E-Cad)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

人Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)elisa试剂盒 英文名称： Human collagen type IV (Col IV) ELISA Kit ,别名: 人Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

大鼠E选择素(E-Selectin/CD62E)elisa试剂盒 英文名称： Rat E selectin (E-Selectin/CD62E) ELISA Kit ,别名: 大鼠E选择素(E-Selectin/CD62E)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

人5核苷酸酶(5-NT)elisa试剂盒 英文名称： 5 nucleotidase (5-NT) ELISA Kit ,别名: 人5核苷酸酶(5-NT)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

大鼠FMS样酪氨酸激酶3(Flt3)elisa试剂盒 英文名称： Rat FMS like tyrosine kinase 3 (Flt3) ELISA Kit ,别名: 大鼠FMS样酪氨酸激酶3(Flt3)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

人5羟基吲哚乙酸(5-HIAA)elisa试剂盒 英文名称： 5 hydroxyindoleacetic acid (5-HIAA) ELISA Kit ,别名: 人5羟基吲哚乙酸(5-HIAA)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

大鼠FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)elisa试剂盒 英文名称： Rat FMS like tyrosine kinase 3 ligand (Flt3L) ELISA Kit ,别名: 大鼠FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

人5羟色胺(5-HT)elisa试剂盒 英文名称： 5 hydroxytryptamine (5-HT) ELISA Kit ,别名: 人5羟色胺(5-HT)elisa检测试剂盒 产品规格: 48T/96T。

大鼠L苯丙氨酸解氨酶(PAL)elisa试剂盒