细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞
在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。
2.研究条件可以人为控制
pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。
3.研究的样本可以达到比较均一性
通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。
4.研究内容便于观察、检测和记录
采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。
产品名称 | 规格 | 货号 |
Primarker™小鼠小脑颗粒细胞鉴定试剂盒 | 6次/盒 | YS-X6995 |
培养操作:
1)复苏细胞:将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻,加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟,弃去上清液,补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜(或将 细胞悬液加入 10cm 皿中,加入约 8ml 培养基,培养过夜)。第二天换液并 检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达 80%-90%,即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分 变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基,轻轻打匀后吸出,在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟,弃去上清液,补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1:2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3)细胞冻存:待细胞生长状态良好时,可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类;
1. 细胞冻存时,弃去培养基后,PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶,细胞变圆 脱 落后,加入 1ml 含血清的培养基终止消化,可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞,根据细胞数量加 入血 清和 DMSO,轻轻混匀,DMSO 终浓度为 10%,细胞密度不低于1x106/ml,每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液,注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中,放入-80 度冰箱,2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取.
冰冻切片组织DAP KINASE蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒 进口/国产 规格:10/20次
发酵丙三醇比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
组织半胱氨酸蛋白酶(PASE)总活性荧光定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
5’端衔接体(LINKER)连接试剂盒 进口/国产 规格:20次
果菜D-葡萄糖酸内脂比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
细胞半胱氨酸蛋白酶-12(PASE-12)活性比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
APC蛋白标记试剂盒 进口/国产 规格:1次(1毫克/次)
体脯氨酸(proline)含量比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
植物钠/钾ATP酶(Na+/K+ -ATPase)活性比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
冰冻切片组织TNF ALPHA蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒 进口/国产 规格:10/20次
真菌/酵母细胞β-半糖苷酶活性高质敏感比色法定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
细胞半胱氨酸蛋白酶-5(PASE-5)活性荧光定量检测试剂盒 进口/国产 规格:20次
Primarker™小鼠小脑颗粒细胞鉴定试剂盒WILKINS-CHALGREN琼脂/WILKINS-CHALGREN厌氧菌琼脂/WILKINS-CHALGREN Agar厌氧菌的分离培养250克国产/进口
人腺导管细胞枯草芽胞杆菌 Bacillus subtilis
TE-13(人食管细胞)5×106cells/瓶×2
胰淀素(IAPP)重组蛋白英文名称:Recombinant Islet Amyloid Polypeptide (IAPP)
嗜热脂肪地芽孢杆菌 Geobacillus stearothermophilus酿酒酵母 Saccharomyces cerevisiae
人气管平滑肌细胞*培养基100mL
绿脓菌素测定用培养基/PDP琼脂/King Medium A绿脓菌色素测定250克国产/进口
异常汉逊酵母 Hansenula anomala大豆慢生瘤菌 Bradyrhizobium japonicum
中慢生华癸瘤菌 Mesorhizobium huakuii解脂亚罗酵母 Yarrowia lipolytica
杀菌性/通透性增加蛋白(BPI)重组蛋白英文名称:Recombinant Bactericidal/Permeability Increasing Protein (BPI)
刺毛鼠肺成纤维样细胞英文名称:CWbRL
培养细胞冻存方案:
以下实验方案介绍了培养细胞冻存的一般流程。详细的实验方案,必须参阅针对具体细胞的产品说明书。
1.配制冻存培养基,于2°C至8°C下储存,直至使用。请注意使用何种冻存培养基取决于所用细胞系。
2.冻存贴壁细胞时,利用传代时所用方法轻柔地使细胞从组织培养容器上脱离下来。用该细胞所需*培养基重新悬浮细胞。
3.采用血球计数器、细胞计数仪按照台盼蓝拒染法或者使用 Countess®自动细胞计数仪测定总细胞数和活细胞百分比。根据所需活细胞密度,计算冻存培养基需要量。
4.以大约100-200×g的离心力将细胞悬液离心5至10分钟。在无菌条件下小心倒掉上清液,不要搅动细胞沉淀。
注:离心速度和时间取决于细胞种类。
5.用预冷的冻存培养基重新悬浮细胞沉淀,将其调整至该细胞适合的活细胞密度。
6.将细胞悬液分装到若干冻存管中。分装时,应不时轻轻混合细胞,使其保持均匀的细胞悬液状态。
7.使用可控制降温速度的冷冻装置冷冻细胞,使温度每分钟大约降低 1°C。或者,将装有细胞的冻存管放入冻存盒中,然后将冻存盒置于-80°C条件下过夜。