4× 核酸液相杂交液10mL说明书详细说明书:
4× 核酸液相杂交液10mL说明书使用方法:
一、交换反应 1. 实验前需自备的试剂:7 M 醋酸铵、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量离心管中制备下列反应液.
3. 37℃反应 30 分钟。
4. 70℃加热 5~10 分钟使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀时使其终浓度达 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷无水乙醇,-20℃放置 30~60 分钟。
7. 离心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。 注:通过第 5~8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP,如要 *将其除去时,乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白质时,请在第 8 步之后进行。
4× 核酸液相杂交液10mL说明书确定洗膜温度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此条件下的洗膜温度比 Tm 低 5-12℃,一般情况下可以在 55℃进行洗膜。Oligo 探针可以室温洗膜。 四、预杂交步骤 预杂交就是用不含探针的超级杂交液跟印迹膜进行孵育,其目的是用所含 的非特异性 DNA 分子(鲑精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物将印 迹膜上会非特异地吸附探针分子的位点封闭,否则这些位点会吸附标记的探 针,造成高背景。
1. 将结合了靶分子的硝酸纤维素印迹膜或尼龙印迹膜浸泡于自备的 6× SSC 溶液中,使其充分湿润。
2. 将湿润的印迹膜置于一塑料杂交袋中(塑料袋预先封口,再剪掉一角, 留一个小口),按每平方厘米印迹膜加 0.2 mL 超级杂交液的比例沿小口 加入超级杂交液,然后用塑料封口机将口封牢。 3. 将此塑料袋浸没入温度设定在杂交温度的恒温水浴中或杂交炉中,保 温 1-2 小时,延长到 12-16 小时亦可。注意保温过程中塑料袋应在不停 的摇动状态中,使超级杂交液与印迹膜充分接触。
4× 核酸液相杂交液10mL说明书步骤:
1. 如果标记的探针是双链核酸,则需经变性处理。具体操作是:根据探针浓 度和杂交所需探针的量计算出所需的探针体积,取出所需体积的探针到一 干净的硅化的塑料离心管中,加入等体积的本产品,吹打混匀后室温放置 5 分钟变性后,将探针样品放入冰浴中冷却,加入 0.05 倍体积的自备的 1 M 的 Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等体积的自备的 0.4 M 的 HCl 溶液。 将探针样品保存在冰浴中直至需要。如果是单链 DNA 或 RNA 探针,则 不需变性,直接使用。
2. 将单链探针或变性后的双链探针加入到完成了预杂交的杂交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探针后用热封机封口)。探针的加入量视探针标记效率 而定,一般要求终浓度不能低于 1-2 ng/mL。如果检测基因组中的单拷 贝基因,探针的加入量应加大,而对于检测克隆的基因片段,则探针的量 可减少。如果是放射性探针,应将此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 杂交袋发生遗漏、污染工作环境。
3. 在选定的杂交温度下继续保温,时间一般为 6-12 小时。 六、洗膜步骤。注意在下面的所有操作过程中,一定不要使印迹。
大鼠游离甲状腺素(FT4)ELISA试剂盒 ,英文名: FT4 ELISA Kit
人中性粒细胞弹性蛋白酶(NE)ELISA检测试剂盒Humanneutrophilelastase,NEELISAKit 96T/48T
大鼠白介素1β(IL-1β)免疫试剂盒 Rat Interleukin 1β,IL-1β ELISA Kit
CLIAKitforTCCC5b-9(MouseterminalcomplementcomplexC5b-9)ELISAKit小鼠末端补体复合物C5b-9规格:48T/96T
人体HLA-DPB1RFLP基因分析试剂盒20次
ELISAKitTTN人抗肌联蛋白抗体规格:48T/96T
大鼠主要组织相容性复合体Ⅱ类(MHCⅡ/AgBⅡ/H-1Ⅱ)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
人血管舒缓激肽(BK)免疫试剂盒 Human Bradykinin,BK ELISA Kit
人抗肝特异性脂蛋白抗体(LSP)ELISA试剂盒 ,英文名: LSP ELISA Kit
RatInterleukin16,IL-16ELISA试剂盒大鼠白介素16(IL-16)ELISA试剂盒规格:96T/48T
Humanglucokinaseregulatoryprotein,GKRPELISA试剂盒人葡萄糖激酶调节蛋白(GKRP)ELISA试剂盒规格:96T/48T
HumanInterleukin5,IL-5ELISAKit人白介素-5(IL-5)ELISA试剂盒规格:96T/48T
小鼠钙结合蛋白(CR)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装
Rat endocrine gland vascular endothelial growth factor (EG-VEGF) ELISA Kit 大鼠内分泌腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)ELISA试剂盒
Humanthrombospondin1,TSP-1ELISAKit 人血小板反应蛋白/*敏感蛋白1(TSP-1)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装
HumanApolipoproteinE,Apo-EELISA试剂盒人载脂蛋白E(Apo-E)ELISA试剂盒规格:96T/48T
植物叶绿体F型ATP酶(FtypeATPase)活性比色法定量检测试剂盒20次
humantoll-likereceptor2,TLR2ELISAKit人toll样受体2(TLR2)ELISA试剂盒规格:96T/48T
13(S)-HODE cholesteryl ester (25 ug) 13S-xy7noxy-9Z,11E-octadecadienoic acid, cholesteryl ester; 13(S)-HODE cholesteryl ester
Darapladib (10 mg) SB 480848; N-[2-(dietxylamino)etxyl]-2-[[(4-fluoropxenyl)metxyl]thio]-4,5,6,7-tetraxy7no-4-oxo-N-[[4’-(trifluorometxyl)[1,1’-bipxenyl]-4-yl]metxyl]-1H-cyclopentapyrimidine-1-acetamide
鬼笔环肽-Fluorescein偶联物 Phalloidin-Fluorescein Conjugate
Dibutyl-3-xy7noxybutyl Phosphate (25 mg) dibutyl 3-xy7noxybutyl esterdibutyl 3-xy7noxybutyl ester-phosphoric acid; TBP-OH; Dibutyl-3-xy7noxybutyl Phosphate
Elaidic Acid (1 g) 9E-octadecenoic acid; trans-Oleic Acid; Elaidic Acid
(3aR, Cantharidin
HBVpol502, HBV polymerase (502-510)Lys-Leu-His-Leu-Tyr-Ser-His-Pro-Ile
β II probeSer-Ser-Leu-Asp-Leu-Ser-Gln-Phe-Pro-Met-Thr-Ala-Ser-Phe-Leu-Arg-Glu-Ser-Arg
[pSer5]-Kemptide, BiotinylatedBiotin-Leu-Arg-Arg-Ala-Ser(PO3H2)-Leu-Gly
Boc-GRR-AMCBoc-Gly-Arg-Arg-AMC
Pannexin-1 Fragment (4512)Val-Gln-Gln-Lys-Ser-Ser-Leu-Gln-Ser-Glu-Ser-Gly-Asn
4× 核酸液相杂交液10mL说明书聚乙二醇400Polyetxylene Glycol 400CP500mL
MD25-3.5透析袋(半周长25mm,直径16mm,截留分子量3500Da)5米/卷0
C0182-5gCytidine 胞嘧啶核苷65-46-35g
Long Taq DNA聚合酶250U
litxium Dodecyl Sulfate25g