微量单链 DNA 定量试剂盒1mL说明书步骤:
1. 如果标记的探针是双链核酸,则需经变性处理。具体操作是:根据探针浓 度和杂交所需探针的量计算出所需的探针体积,取出所需体积的探针到一 干净的硅化的塑料离心管中,加入等体积的本产品,吹打混匀后室温放置 5 分钟变性后,将探针样品放入冰浴中冷却,加入 0.05 倍体积的自备的 1 M 的 Tris-Cl 溶液(pH 7.2)以及等体积的自备的 0.4 M 的 HCl 溶液。 将探针样品保存在冰浴中直至需要。如果是单链 DNA 或 RNA 探针,则 不需变性,直接使用。
2. 将单链探针或变性后的双链探针加入到完成了预杂交的杂交袋中(先用剪 刀剪一小口,加入探针后用热封机封口)。探针的加入量视探针标记效率 而定,一般要求终浓度不能低于 1-2 ng/mL。如果检测基因组中的单拷 贝基因,探针的加入量应加大,而对于检测克隆的基因片段,则探针的量 可减少。如果是放射性探针,应将此塑料袋套在另一塑料袋之中,以避免 杂交袋发生遗漏、污染工作环境。
3. 在选定的杂交温度下继续保温,时间一般为 6-12 小时。 六、洗膜步骤。注意在下面的所有操作过程中,一定不要使印迹。
微量单链 DNA 定量试剂盒1mL说明书使用方法:
一、交换反应 1. 实验前需自备的试剂:7 M 醋酸铵、乙醇、70%乙醇等
2. 在微量离心管中制备下列反应液.
3. 37℃反应 30 分钟。
4. 70℃加热 5~10 分钟使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4(pH 4.5)。如使用 CH3COONa 做 乙醇沉淀时使其终浓度达 300 mM。
6. 加入 87.5 μL(2.5 倍)的冷无水乙醇,-20℃放置 30~60 分钟。
7. 离心回收沉淀,用 70%的冷乙醇清洗沉淀,真空干燥。
8. 用适当 Buffer 溶解沉淀。 注:通过第 5~8 步操作几乎可以除去大部分未反应的[γ-32P] ATP,如要 *将其除去时,乙醇沉淀后用凝胶过滤等方法精制即可。如需用*抽 提除去蛋白质时,请在第 8 步之后进行。
微量单链 DNA 定量试剂盒1mL说明书详细说明书:
微量单链 DNA 定量试剂盒1mL说明书确定洗膜温度:
一般使用 0.1×SSC 做洗膜液,在此条件下的洗膜温度比 Tm 低 5-12℃,一般情况下可以在 55℃进行洗膜。Oligo 探针可以室温洗膜。 四、预杂交步骤 预杂交就是用不含探针的超级杂交液跟印迹膜进行孵育,其目的是用所含 的非特异性 DNA 分子(鲑精 DNA 或小牛胸腺 DNA)及其它高分子化合物将印 迹膜上会非特异地吸附探针分子的位点封闭,否则这些位点会吸附标记的探 针,造成高背景。
1. 将结合了靶分子的硝酸纤维素印迹膜或尼龙印迹膜浸泡于自备的 6× SSC 溶液中,使其充分湿润。
2. 将湿润的印迹膜置于一塑料杂交袋中(塑料袋预先封口,再剪掉一角, 留一个小口),按每平方厘米印迹膜加 0.2 mL 超级杂交液的比例沿小口 加入超级杂交液,然后用塑料封口机将口封牢。 3. 将此塑料袋浸没入温度设定在杂交温度的恒温水浴中或杂交炉中,保 温 1-2 小时,延长到 12-16 小时亦可。注意保温过程中塑料袋应在不停 的摇动状态中,使超级杂交液与印迹膜充分接触。
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13(S)-HODE-biotin (500 ug) 13S-xy7noxy-9Z,11E-octadecadiene-(2-biotinyl)hydrazide; 13(S)-HODE-biotin
RHC-80267 (25 mg) U-57908; 1,1’-[O,O’-[1,6-hexanediylbis(iminocarbonyl)]dioxime]
鬼笔环肽-iFluor 405偶联物 Phalloidin-iFluor 405 Conjugate
4-xy7noxyamphetamine (xy7nochloride) (10 mg) 4-
Oleic Acid (1 g) 9Z-Octadecenoic acid; Oleic Acid
9H-Inde,2-e][1,2,5]oxadiazolo[3,4-b]pyrazin-9-one SMER-3
HCV Core Protein (59-68)Arg-Gly-Arg-Arg-Gln-Pro-Ile-Pro-Lys-Ala
β-Amyloid (10-20)Tyr-Glu-Val-His-His-Gln-Lys-Leu-Val-Phe-Phe
[Pyr16]-VIP (16-28) (chicken)Pyr-Met-Ala-Val-Lys-Lys-Tyr-Leu-Asn-Ser-Val-Leu-Thr-NH2
BombesinPyr-Gln-Arg-Leu-Gly-Asn-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-Met-NH2
PAR-1-selective peptideThr-Phe-Leu-Leu-Arg-Asn
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SH65000透析袋夹子 6cm6cm0
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