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仪表网>产品库>实验仪器>其他实验仪器>其它仪器>小鼠内皮细胞分离液 1.071200mL操作步骤
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小鼠内皮细胞分离液 1.071200mL操作步骤

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  • 更新时间2017-07-20
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小鼠内皮细胞分离液 1.071200mL操作步骤如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是 比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
小鼠内皮细胞分离液 1.071200mL操作步骤 产品详情

小鼠内皮细胞分离液 1.071200mL操作步骤对于培养细胞样品:
1. 融解 RIPA 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF 使 PMSF 的终浓度为 1mM
2. 裂解细胞 2.1 对于贴壁细胞:去除培养液,用 PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血 清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照 6 孔板每孔加入 150-250 微升裂解液的比 例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞 1-2 秒后,细胞就会被裂解。 2.2 对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照 6 孔板每孔细胞 加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分 裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成 50-100 万细胞/管, 然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。 注意:通常 6 孔板每孔细胞加入 150 微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高 可以适当加大裂解液的用量到 200 微升或 250 微升。
小鼠内皮细胞分离液 1.071200mL操作步骤产品及特点:
SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)是目前电泳法变性分离蛋白质的主要方法,但是单独配制各种溶液十分繁琐,为此天泽基因开发了本产品。它具有下列特点:
1.
一站式,即开即用,用户不需单独准备各种成分,十分方便。
2. 安全,将实验人员接触粉末状丙烯酰胺的可能降到低。
3. 灵活,分开提供的丙烯酰胺和甲叉双丙烯酰胺便于配制各种比例和浓度的 SDS-PAGE,满足分离各种大小不同的蛋白质的要求。
4. 使用改良的浓缩胶缓冲液,由于其含有染料,制备的浓缩胶呈蓝色,便于上样时识别加样孔。
5. 电泳后可直接用于考染、银染、Western 杂交等实验。
小鼠内皮细胞分离液 1.071200mL操作步骤详细说明书:

小鼠内皮细胞分离液 1.071200mL操作步骤对于组织样品:
1. 把*切成细小的碎片。
2. 融解 RIPA 裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入 PMSF 使 PMSF 的终浓度为 1mM
3. 按照每 20 毫克组织加入 150-250 微升裂解液的比例加入裂解液。(如果裂解不 充分可以适当添加更多的裂解液,如果需要高浓度的蛋白样品,可以适当减少裂解 液的用量。)
4.
用玻璃匀浆器匀浆,直至充分裂解。
5. 充分裂解后,10000-14000g 离心 3-5 分钟,取上清,即可进行后续的 PAGE Western 和免疫沉淀等操作。
6. 如果组织样品本身非常细小,可以适当剪切后直接加入裂解液裂解,通过强烈 vortex 使样品裂解充分。然后同样离心取上清,用于后续实验。直接裂解的优点是 比较方便,不必使用匀浆器,缺点是不如使用匀浆器那样裂解得比较充分。
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