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产品名称 | GT115 感受态细胞 100ul*50 |
包装 | 100ul*50 |
分类 | 克隆感受态细胞 |
培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
操作方法:
1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。
shēng huà shì jì 吐温40 容量: 2~8℃ 10克
shēng huà shì jì 吐温20 容量: 10克
shēng huà shì jì 土耳其红油 容量: RT 5克
shēng huà shì jì 透析用玻璃纸 容量: 保存:-20℃ 100毫克
shēng huà shì jì 透析袋夹 容量: 1条
shēng huà shì jì 透析袋8DM,10MD 容量: 保存:-20℃ 1000u
shēng huà shì jì 透析袋7000 容量: HC1000u
shēng huà shì jì 透析袋6000 容量: 1000u
shēng huà shì jì 透析袋4000 容量: 200u
GT115 感受态细胞 100ul*50shēng huà shì jì 透析袋36DM,44MD 容量: LC200u
shēng huà shì jì 透析袋3500 容量: 1000u
shēng huà shì jì 透析袋3000 容量: 200u
shēng huà shì jì 透析袋27DM,34MD 容量: 保存:-20℃ LC200u
shēng huà shì jì 透析袋20DM,25MD 容量: LC1000u
shēng huà shì jì 透析袋17,8DM,77MD 容量: LC1000u
shēng huà shì jì 透明质酸钠 容量: 1公斤
shēng huà shì jì 透明质酸酶 容量: RT 1克
shēng huà shì jì *钠 容量: 25克
shēng huà shì jì *钠 容量: RT 5克
shēng huà shì jì *C锌盐 容量: 5克
shēng huà shì jì 铜铁试剂 容量: 100克
shēng huà shì jì 铜丝 容量: 2~8℃ 25克
shēng huà shì jì 铜片 容量: 2~8℃ 1克
shēng huà shì jì 铜粉 容量: 2~8℃ 500
TpP 大鼠血栓前体蛋白 规格: 48T/96T
TM 大鼠血栓调节蛋白 规格: 48T/96T
CH50 大鼠血清总补体 规格: 48T/96T
NO 大鼠血清一氧化氮 规格: 48T/96T
SAA 大鼠血清淀粉样蛋白A 规格: 48T/96T
GMP-140 大鼠血浆α颗粒膜蛋白 规格: 48T/96T
HO-2 大鼠血红素氧合酶2 规格: 48T/96T
HO-1 大鼠血红素氧合酶1 规格: 48T/96T
ADAMTS13/vWF-cp 大鼠血管性血友病因子裂解蛋白酶 规格: 48T/96T
VWF 大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素辅因子 规格: 48T/96T
BK 大鼠血管舒缓激肽 规格: 48T/96T
ANG-R-Tie2 大鼠血管生成素受体Tie2 规格: 48T/96T
ANG-R-Tie1 大鼠血管生成素受体Tie1 规格: 48T/96T
ANG-4 大鼠血管生成素4 规格: 48T/96T
ANG-2 大鼠血管生成素2 规格: 48T/96T
ANG-1 大鼠血管生成素1 规格: 48T/96T
ANG 大鼠血管生长素 规格: 48T/96T
VCAM-1/CD106 大鼠血管内皮细胞粘附分子1 规格: 48T/96T
VEGFR-2 大鼠血管内皮细胞生长因子受体2 规格: 48T/96T
VEGFR-1 大鼠血管内皮细胞生长因子受体1 规格: 48T/96T
VEGF-D 大鼠血管内皮细胞生长因子D 规格: 48T/96T
VEGF-C 大鼠血管内皮细胞生长因子C 规格: 48T/96T
VEGF-B 大鼠血管内皮细胞生长因子B 规格: 48T/96T
毫克
shēng huà shì jì 铜箔 容量: RT,避光 25克
注意事项:
1. 产品仅用于科研感受态细胞在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少Z终用于涂板的菌量。
操作步骤:
1.取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2.待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3.42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟
4.每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏
5.根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。