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产品名称 | DH10B-Plus 电击感受态细胞 50ul*20 |
包装 | 50ul*20 |
分类 | 克隆感受态细胞 |
培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
操作方法:
1. 从-80℃拿出,迅速插入冰中,5分钟后待菌块融化,加入目的DNA(质粒或连接产物)并用手EP管底轻轻混匀(避免用枪吸打),冰中静置25分钟。
2. 42℃水浴热激45秒,迅速放回冰中并静置2分钟,晃动会降低转化效率。
3. 向离心管中加入700 μl不含抗生素的无菌培养基 (2YT或LB),混匀后37℃,200 rpm复苏60分钟。
4. 5000 rpm离心一分钟收菌,留取100 μl左右上清轻轻吹打重悬菌块并涂布到含相应抗生素的2YT或LB培养基上。
5.将平板倒置放于37℃培养箱过夜培养。如果进行蓝白斑筛选操作,将平板放37℃培养至少15小时。
FAS/CD95 人凋亡相关因子 规格: 48T/96T
βAPP 人淀粉样前体蛋白 规格: 48T/96T
Amylase 人* 规格: 48T/96T
ETFB 人电子转移黄素蛋白β肽 规格: 48T/96T
FⅧAg 人第八因子相关抗原 规格: 48T/96T
Resistin 人抵抗素 规格: 48T/96T
HIF-1α 人低氧诱导因子1α 规格: 48T/96T
LRP-6 人低密度脂蛋白受体相关蛋白6 规格: 48T/96T
LDLR 人低密度脂蛋白受体 规格: 48T/96T
LDL-IC 人低密度脂蛋白免疫复合物 规格: 48T/96T
LDH10B-Plus 电击感受态细胞 50ul*20DL 人低密度脂蛋白 规格: 48T/96T
LMP7/PSMB9 人低分子质量蛋白7 规格: 48T/96T
LMWH 人低分子肝素 规格: 48T/96T
NGF 人的神经生长因子 规格: 48T/96T
人的牛血清白蛋白残留检测ELISA Kit,48T/96T 人的牛血清白蛋白残留检测ELISA Kit,48T/96T 规格: 48T/96T
ConA 人刀豆素A 规格: 48T/96T
PLP 人蛋白脂质蛋白抗体 规格: 48T/96T
PR3-ANCA 人蛋白酶3特异性抗中性粒细胞胞质抗体 规格: 48T/96T
注意事项:
1. 产品仅用于科研感受态细胞在冰中缓慢融化,插入冰中8分钟内加入目标DNA,不可在冰中放置时间过长,长时间存放会降低转化效率。
2. 混入质粒或连接产物时应轻柔操作。
3. 转化高浓度的质粒或高效率的连接产物可相应减少Z终用于涂板的菌量。
操作步骤:
1.取感受态细胞置于冰浴中。一次转化感受态细胞的建议用量为50-100可以根据实际情况分装使用。以下实验以50μl感受态细胞为例。
2.待感受态细胞融化后,向感受态细胞悬液中加入目的DNA(根据实际情况加入适量的DNA,通常100 μl感受态细胞能够被1 ng超螺旋质粒DNA所饱和),用移液器轻轻吹打混匀,冰浴30分钟。
3.42℃热击45秒,迅速将离心管转移到冰浴中,冰上静置2-3分钟
4.每个离心管中加入450μl无菌的SOC或LB培养基(不含抗生素),混匀后置于37℃摇床,150rpm振荡培养45分钟使菌体复苏
5.根据实验需求,取适量已转化的感受态细胞,加到含相应抗生素的或LB固体琼脂培养基上,用无菌的涂布棒将细胞均匀涂开,将平板置于37℃直至液体被吸收,倒置培养,37℃培养12-16小时。