操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
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产品名称 | |
规格 | 1×10⁶cells/T25培养瓶 |
货号 | BJ-X96472 |
商品属性：
名称 MDBK (NBL-1) (牛肾细胞) 别称MDBK (NBL-1); NBL-1; Madin-Darby Bovine Kidney; Madin Darby Bovine Kidney 种属牛 年龄（性别）雄性，成年 组织来源肾；正常细胞 生长特性贴壁细胞 细胞形态上皮细胞样 背景描述MDBK(NBL-1)细胞是由S·H·Madin和N·B·Darby在1957年2月18日从一只表观正常的成年牛肾脏建立的。1973年，这株MDBK(NBL-1)细胞被牛病毒性痢疾病毒(BVDV)感染；1982年，发现了一株未被BVDV感染的MDBK(NBL-1)细胞株，此细胞最初来自ATCC1967年7月第96代的冻存管。MDBK(NBL-1)细胞的后代经NVSL检测，未发现被任何病毒污染的证据。1982年8月，R·A·Van Deusen将MDBK(NBL-1)提供给ATCC时，已传代至第110代；MDBK(NBL-1)细胞未被BVDV感染。 生物安全等级2 生长培养基RPMI-1640＋10% FBS＋1% P/S 推荐传代比例1:2-1:4 推荐换液频率2~3次/周 倍增时间~35小时 冻存条件 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度：液氮 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃ 基因表达情况keratin |
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
食蟹猴 BMP4 基因全长ORF克隆
食蟹猴 TGFB3 基因全长ORF克隆
食蟹猴 TGFB2 基因全长ORF克隆
食蟹猴 CSF1R 基因全长ORF克隆
食蟹猴 BTC 基因全长ORF克隆
食蟹猴 PDGFC 基因全长ORF克隆
食蟹猴 PDGFB 基因全长ORF克隆
食蟹猴 CSF1 基因全长ORF克隆
食蟹猴 ANGPTL7 基因全长ORF克隆
食蟹猴 ANGPT2 基因全长ORF克隆
MDBK (NBL-1) (牛肾细胞)50T 猴痘病毒PCR检测试剂盒 低温运输，-20℃保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human FAS-associated factor 2
100mg 多核苷酸化 Polynucleotide Phosphorylase -20℃保存 0.625-40 ng/mL 人60S核糖体蛋白(60S ribosomal protein L13)ELISA试剂盒
改良克氏双糖铁培养基 Modified KIA Iron Medium 250g
250mL MES Buffer,1.0M,pH8.0 MES Buffer,1.0M,pH8.0 常温保存Kovacs氏靛基质试剂盒进口、国产（靛基质）试验配套试剂10ml*1
2 ug pEXP-Lib pEXP-Lib 低温运输，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人基质金属蛋白9/明胶B(MMP-9/Gelatinase B)ELISA试剂盒
Culture培养基 Culture Medium 250g 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Matrix metalloproteinase-28
250mL 通用洗柱液 溴百里蓝乳糖胱琼脂进口、国产Cystine-Lactose-Electrolyte Deficient Agar250克尿液中微生物的选择性分离培养
2 ug pPinPoint-Xa3 pPinPoint-Xa3 低温运输，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人D二聚体(D2D)ELISA试剂盒
5次 大提无内毒素质粒DNAout Maxi Column Endo-free Plasmid DNAOUT 常温保存(RNase A溶液4℃保存)
NAC液体培养基 NAC Solid Medium 250g 1.56-100 U/L ELISA Kit for Human Heparanase
2 ug pCMV-SPORT6 ST13 pCMV-SPORT6 ST13 低温运输，-20℃保存 15.6-1000 U/L 霍乱弧菌(VC)核酸检测试剂盒(PCR-荧光探针法)
