巩膜成纤维细胞公司正在出售的产品：琥珀单酯 规格： 100mg
木犀草-7-O-新橙皮糖 规格： HPLC≥98%;20mg
规格： 20mg
39011-91-1羟基芍药;oxypaeoniflori 规格： 20mg
130-86-9原 规格： HPLC≥98%;20mg
规格： 1g
6155-35-7鼠李糖;L-Rhamse moh 规格： 100mg
59-30-3叶 规格： 20m
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产品名称 | 巩膜成纤维细胞 |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
分类 | 原代细胞 |
货号 | GOY-01X1380 |
商品介绍：
名称 巩膜成纤维细胞 2.组织来源：巩膜组织 3.产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介： 人巩膜成纤维细胞分离自巩膜组织，巩膜是眼球壁的主要组成之一。是眼球纤维膜的后5/6部分。前方联接角膜，后方与视神经的鞘膜延续。巩膜在视神经穿出部附近最厚，愈前愈薄，在肌腱附着处又复增厚（巩膜厚度：后极部1mm，赤道部0.4～0.5mm，直肌附着处0.3mm）。其与角膜交界处，外面有环形的角膜沟，深部有巩膜静脉窦。小儿的巩膜为浅蓝色，成年为白色，老年因脂肪沉着而带黄色。巩膜结构坚韧，有支持和保护眼内组织的作用。成纤维细胞是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来；成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的肺成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。 5.方法简介： ()实验室分离的人巩膜成纤维细胞采用混合胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测： ()实验室分离的人巩膜成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息： 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-H242 换液频率每2-3天换液一次； 生长特性贴壁 细胞形态成纤维细胞样 传代特性可传3-5代左右 消化液0.25% |
使用方法：
收到细胞后，请按照以下方法进行操作。
1. 取出25cm2培养瓶，75%酒精消毒，拆下封口膜，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中静置6-8小时或者过夜，以稳定细胞状态。
2. 待细胞达到80%汇合时准备进行传代培养。
3. 细胞传代
1) 吸出25cm2培养瓶中的培养基，用PBS清洗细胞一次；
2) 添加0.125%消化液约1mL至培养瓶中，37℃温浴3min左右；倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后吸弃消化液，再加入*培养液终止消化；
3) 用吸管轻轻吹打混匀，按1:2或1:3等适当的比例进行接种传代，然后补充新鲜的*培养基至5mL，放入37℃，5% CO2细胞培养箱中培养；
4) 待细胞*贴壁后，培养观察。之后每隔2-3天更换新鲜的*培养基。
培养操作：
1）复苏细胞：将含有 1mL 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4mL 培养基混合均 匀。在 1000RPM 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2mL 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜（或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜）。第二天换液并 检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。
1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 PBS 润洗细胞 1-2 次。
2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中消化 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。
3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000RPM 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2mL 培养液后吹匀。
4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。
3）细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面 T25 瓶为类；
1. 细胞冻存时，弃去培养基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml ，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。
2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 DMSO，轻轻混匀，DMSO 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。
3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
2 ug pVL1393 pVL1393 低温运输，-20℃保存
含225mlEC肉汤均质袋 10个/包
1000 U 限制性内切PvuII Restriction Endonuclease -20℃保存
250mL RNase-Free SSC（无RNase的SSC）,20X RNase-Free SSC,20X 常温保存
1 管 BL21(AI)大肠杆菌 BL21(AI) E.coli Strain -80℃保存
2 ug pQETirs-system pQETirs-system 低温运输
巩膜成纤维细胞多价蛋白胨 英文名称：Polypeptone 产品规格：250g 小鼠5核苷酸(5-NT)免疫试剂盒进口、组装
特殊蛋白胨 英文名称：Peptone Special 产品规格：250g 小鼠Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)免疫试剂盒进口、分装
去氧胆酸钠 英文名称：Desoxycholate Salt 产品规格：100g 小鼠4-羟基壬烯酸(HNE)免疫试剂盒现货供应
酵母浸粉 英文名称：Yeast Extract Powder 产品规格：250g 小鼠Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)免疫试剂盒*直销
猪胃消化粉 英文名称： 产品规格：250g 小鼠Ⅲ型前胶原氨基端肽(PⅢNT)免疫试剂盒进口、组装
猪胆粉 英文名称： 产品规格：250g 小鼠Ⅲ型前胶原(HPCⅢ)免疫试剂盒进口、分装
酵母浸粉（进口） 英文名称：Yeast Extract Powder 产品规格：250g 小鼠Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)免疫试剂盒现货供应
麦芽浸粉 英文名称： 产品规格：200g 小鼠3-硝基酪(3-NT)免疫试剂盒*直销
干酪素 英文名称： 产品规格：250g 小鼠3-α羟基类固醇脱氢(Akr1c9)免疫试剂盒进口、组装
水解乳蛋白 英文名称： 产品规格：250g 小
