细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
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产品名称 | |
规格 | 1×10⁶cells/T25培养瓶 |
货号 | BJ-X96522 |
商品属性：
名称 SCaBER (膀胱鳞癌细胞) 别称SCABER; Scaber 种属人类 年龄（性别）男性，58岁 组织来源膀胱；鳞癌 生长特性贴壁细胞 细胞形态上皮细胞样 背景描述SCaBER细胞含有不常见的G6PD A型同工酶。 生物安全等级1 生长培养基MEMMEM(PM150467 )(ATCC改良)(PM150467 )＋10% FBS＋1% P/S 推荐传代比例1:3-1:4 推荐换液频率2~3次/周 冻存条件 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度：液氮 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃ 致瘤性Yes, epidermoid carcinoma forms in nude mice. |
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
人 TNFRSF11B 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签
人 TNFRSF11B 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签
人 MMP-12 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签
人 MMP-12 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签
人 FCGR2B / CD32b 转录变体2 基因全长ORF克隆 (表达载体), 无标签
人 FCGR2B / CD32b 转录变体2 基因全长ORF克隆 (表达载体), 带FLAG标签
人 DcR3 / TNFRSF6B 转录变体M
SCaBER (膀胱鳞癌细胞) 2 ug pGL4.19[lucCP/Neo] pGL4.19[lucCP/Neo] 低温运输，-20℃保存 0.312-20 ng/mL 人成纤维生长因子10(FGF-10)ELISA试剂盒
25mL Tris-Glycine-Native Sample Buffer,4X Tris-Glycine-Native Sample Buffer,4X 常温保存 3.12-200 ng/mL 人胎盘蛋白(GD)ELISA试剂盒
棉子糖发酵管 20支 0.312-20 ng/mL. 人四旋蛋白14(Tspan-14)ELISA试剂盒
m-TEC琼脂 m-TEC Agar 250g
48 T 碱性测试剂盒 Oxidative Stress Detection Kit 常温保存 78-5000 pg/mL ELISA Kit for Human La-related protein 7
1盒 无内毒素枪头，200 μL 0.156-10 ng/mL 人夏科雷登氏结晶蛋白(CLC)ELISA试剂盒
100µL 小鼠抗Tag-100标签蛋白单抗 Anti Tag-100-Tag Mouse MAb -20℃保存 0.156-10 ng/mL 人蛋白激活受体2(PAR-2)ELISA试剂盒
HBI微生物生化鉴定条 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Glutaredoxin-3
20次 即用型蓝白T载体B型（T7-T3,有MCS） Instant Blue-White Vector T，Type B -20℃保存
2 ug pSEP2 pSEP2 低温运输，-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人α1微球蛋白/bikunin蛋白前体(AMBP)ELISA试剂盒
0.1mL×10 BL21(DE3)化学感受态 BL21 (DE3) Competent Cell -80℃保存 78-5000 pg/mL 人XXVII型胶原(COLXXVII)ELISA试剂盒
