操作要点：
1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。
2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。
4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。
5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。
6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
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产品名称 | CRFK (猫肾细胞) |
规格 | 1×10⁶cells/T25培养瓶 |
货号 | BJ-X96390 |
商品属性：
名称 CRFK (猫肾细胞) 别称CrFK; Crfk; Crandell Reese Feline Kidney; Crandell Feline Kidney; CCC; Crandell's Cat Cell 种属家猫 年龄（性别）雌性，12周龄 组织来源肾，皮层；正常 生长特性贴壁细胞 细胞形态上皮细胞样 背景描述CRFK细胞不含牛病毒性痢疾(BVD)病毒。 生物安全等级1 生长培养基MEM（ATCC改良)＋10% FBS＋1% P/S 推荐传代比例1:3-1:4 推荐换液频率2~3次/周 冻存条件 冻存液：55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度：液氮 培养条件 气相：空气，95%；CO2，5% 温度：37℃ |
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养操作规程：
一．培养基及培养冻存条件准备：
1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。
2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。
3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。
二．细胞处理：
1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。
对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：
方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
大鼠 DCN 基因全长ORF克隆
大鼠 TUFM 基因全长ORF克隆
大鼠 SERPINC1 基因全长ORF克隆
大鼠 VDAC3 基因全长ORF克隆
大鼠 YIPF2 基因全长ORF克隆
大鼠 CSRP1 基因全长ORF克隆
大鼠 BRE 基因全长ORF克隆
大鼠 OTC 基因全长ORF克隆
大鼠 UQCRC1 基因全长ORF克隆
大鼠 CGM4 基因全长ORF克隆
CRFK (猫肾细胞)10次 糖蛋白染色试剂盒 Staining Kit for Glycoprotein -20℃保存
铜绿假单胞菌（绿脓杆菌） 0.625-40 ng/ml 人B淋巴瘤因子2(Bcl-2)ELISA试剂盒
50T 志贺菌ipaH 基因荧光PCR检测试剂盒(探针法) 低温运输，-20℃保存 78-5000 pg/mL 人DNA错配修复蛋白MSH2(hMSH2)ELISA试剂盒
2 ug pLV-cGFPI pLV-cGFPI 低温运输，-20℃保存
50T 人黏附分子ICAM基因PCR检测试剂盒 低温运输，-20℃保存
100mg 5- 溴 -4- 氯 -3- 基盐 (BCIP) BCIP -20℃保存 31.2-2000 pg/mL 人尿皮质素2(UCN2)ELISA试剂盒
2 ug SB-T6 SB-T6 低温运输，-20℃保存 7.8-500 pg/mL ELISA Kit for Human Type-1 angiotensin II receptor
200 mL 人中性粒分离液1.085 Cell Separation Solution -20℃保存 31.2-2000 pg/mL 人钴胺传递蛋白1(TC-1)ELISA试剂盒
2 ug pWHM3 pWHM3 低温运输，-20℃保存 15.6-1000 pg/mL ELISA Kit for Human Complement C5
2 ug pB531A-2 pB531A-2 低温运输，-20℃保存 0.78-50 ng/mL 人垂体腺苷酸环化激活肽（ PACAP）ELISA试剂盒
100次 柱式DNA胶回收试剂盒 Column DNABACK 常温保存 1.56-100 IU/mL ELISA Kit for Human Sperm protamine P1
