实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
拟态弧菌PCR荧光定量检测试剂盒 | Vibrio mimicusPCR | 多种规格 | BJ-P7469 |
特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
储存条件:-20℃以下,有效期12个月。
二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。 | 三、注意事项 1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。设立一个专用的PCR实验室。 2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。 3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。 5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。 6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。 7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
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操作流程
1. 整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器 、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2. 为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3. 每次实验应该设置阴、阳性对照。
4. 所有试剂在使用应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。
5. 试剂盒内所配阴性和阳性对照在一次使用应全部转移至标本准备区,并单独存放。
6. 为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7. 仪器 扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。
8. ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。
9. 实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
Fructus jujubae大枣染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周CINP CDK2相互作用蛋白抗体 规格: 0.2mlC1orf149 1号染色体开放阅读框149抗体 规格: 0.2ml
Clostridium difficile艰难梭状芽孢杆LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周CK1 细胞角蛋白1抗体 规格: 0.1mlGoat Anti-Mouse IgM/FITC FITC标记的羊抗小鼠IgM 规格: 0.3ml
Yersinia enterocolitica小肠结肠炎耶尔森探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Mouse Anti-human IgG(3D3)/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5标记的鼠抗人IgG单克隆抗体 规格: 0.1ml
Fructus canarii青果探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周Caspase-6 (NT) 半胱胺酸蛋白蛋白-6抗体(N端) 规格: 0.1ml
Mannheimia glucosida葡萄糖苷曼氏杆LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Rabbit Anti-Goat IgG/RBITC 罗丹明标记的兔抗羊IgG 规格: 0.3ml
Grass Carp Reovirus(GCRV)草鱼呼肠孤病毒3型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Phospho-MAP2 (Thr1620/1623) 磷酸化微管相关蛋白2抗体 规格: 0.1ml
Influenza Virus A甲型流感()病毒H5N6亚型RT-LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用) 50次 低温 负20度 一年 2-4周CYP21 21-羟化抗体 规格: 0.2ml
山羊源性成分LAMP试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周C2orf89 2号染色体开放阅读框89抗体 规格: 0.2ml
Gyrodactylus salaris三代虫探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周RNF36 环指蛋白36抗体 规格: 0.2ml
potato Virus Y(PVY)马铃薯病毒Y型RT-PCR试剂盒 植物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Collagen IV/Arresten 抗IV型胶原抗体 规格: 0.1ml
拟态弧菌PCR荧光定量检测试剂盒1mg 碱性 ( 牛小肠 ) Phosphatase Alkaline(Calf Intestine) -20℃保存
PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液(2015药典) Buffered Sodium Chloride – Peptone Solution 250g
20次 包涵体微量纯化试剂盒 Inclusion Body Miniprep Kit 4℃保存(和核酸清除剂需要-20℃保存,包涵体溶解液室温保存)
2 ug pSUOER-retro-neo pSUOER-retro-neo 低温运输,-20℃保存
50次 TRIzol伴侣 TRIzol-Mate 常温
2 ug pCMV-Tag 2B pCMV-Tag 2B 低温运输,-20℃保存
动力-硝酸盐(A法) Power - nitrate medium 250g
500g 亚铁化钾 ( 三水合 ) Potassium Ferrocyanide Trihydrate 室温密封干燥保存
50T 和痢疾杆菌PCR联合测定试剂盒 低温运输,-20℃保存
200 mL 人粒细胞分离液1.113 Cell Separation Solution -20℃保存
BPLS琼脂 BPLS Agar 250g