细胞名称 抗人fusion单抗杂交瘤细胞;1F4E6A2*
形态特性 淋巴母细胞样
生长特性 半贴壁生长
特征特性 可产生抗人fusion的单克隆抗体
培养条件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
传代方法 1:3传代,2-3天传一代
传代情况 C30
冻存条件 基础培养基+5%DMSO+20%FBS
支原体检测 阴性
STR
同工酶
染色体
使用权限 A类
抗人fusion单抗杂交瘤细胞;1F4E6A2*操作流程:
1.1 主要试剂与仪器:倒置相差显微镜(日本 olympus imt-413),co2孵箱(日本yamato it-61)。
1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存:
1.2.1 细胞的复苏培养 从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。 将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液(37℃预热,8~10倍体积)离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液, 以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内,在37℃、5%co2及饱和湿度下培养。
1.2.2 细胞传代 原代培养的hek-293细胞48h换液1次,细胞长至60%~70%融合时,用0.25%胰酶消化1~2min,将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散,为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次,获得细胞悬液,然后加入倍量的培养基,温和混匀,吸管分装混合液,传代扩增细胞。
1.3 细胞形态的观察 在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。
1.4 细胞的计数 常规消化细胞,待细胞变圆、脱壁并浮起,加入少量培养基离心,再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液,用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数,按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液=(四方格细胞数之和/4) ×104。
1.5 细胞的贴壁率 指数生长期的细胞,以0.25%胰酶消化成单细胞悬液,计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中,每两小时随机取出3瓶细胞,吸除培养基及未贴壁细胞,加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞,取其平均值,按照公式:贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数) ×100%,计算贴壁率。
1.6 生长曲线 取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液,以1×104/孔接种于24孔板,每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔,计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d,绘制细胞生长曲线
抗人fusion单抗杂交瘤细胞;1F4E6A2*注意事项:
1. 接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。
2.用75%的酒精消毒(建议配置75%的酒精的水是灭菌过的)。
3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。
4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。
5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。
6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。
7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。
抗人fusion单抗杂交瘤细胞;1F4E6A2*美国菌种保藏中心, 又称美国模式菌种收集中心(ATCC),是位于马里兰洲洛克菲勒的一家私营的,非赢利性组织。目前它可以提供各种动植物细胞、标准品、菌株达两万多种。ATCC成立于1925年,是世界上大的生物资源中心,由美国14家生化、医学类行业协会组成的理事会负责管理,是一家性、非盈利生物标准品资源中心。ATCC向发布其获取、鉴定、保存及开发的生物标准品,推动科学研究的验证、应用及进步 ATCC可以提供以下类别生物标准品:细胞株(3000多种);菌株(15000多种);动植物病毒株(2500多种)以及重组物质等。
肉汤培养基250g用于初次分离细菌的增菌培养
糖发酵基础肉汤 Bromcresol Purple Broth Base 适用于微生物检验中各种糖发酵实验,无菌加入各种糖醇类物质(SN标准)
SCHAEDLER厌氧菌琼脂 SCHAEDLER Agar 250克 厌氧菌的分离培养
亚碲酸钾血琼脂基础250g/瓶用于白喉杆菌的分离培养,需添加亚碲酸钾及羊血incubationmedia亚碲酸钾血琼脂基础250g/瓶用于白喉杆菌的分离培养,需添加亚碲酸钾及羊血
EnterococcusBroth
GYP白亚琼脂培养基 250g 用于乳酸菌的分离培养
酪蛋白葡萄糖肉汤 250g 用于霉菌、酵母菌等的增菌培养
支原体培养基 250g 用于培养支原体的基础培养基
EG培养基 250g 用于厌氧菌计数
FS培养基250g用于梭杆菌的选择性增菌培养
尿素酶琼脂基础 Urease Agar Base 生化培养基,用于细菌脲酶检测(GB、SN标准)
无脂肪奶粉 Nonfat-Dried Milk 250克 蛋白组级
Campy-Cefex琼脂培养基250g/瓶每200ml培养基中添加马血和07制备改良Campy-Cefex琼脂,每200ml培养基中添加马血和07cubationmediaCampy-Cefex琼脂培养基250g/瓶每200ml培养基中添加马血和07制备改良Campy-Cefex琼脂,每200ml培养基中添加马血和0718
乳糖莫能霉素葡萄糖醛酸琼脂 250g 用于滤膜MUG法检测食品中大肠菌群数(SN/T1059.2)
SV40T转化的人胚肾细胞;293T
MET Others Human 人 c-MET / HGFR (aa 956-1390) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
CL-0364HuT 78(人T淋巴细胞白血病细胞)5×106cells/瓶×2
HSC-T6, 大鼠肝星状细胞系 人绒癌细胞VP16耐药株TNFa转染,JEG-3/VP16-TNFa细胞 7F2(小鼠杂交瘤细胞)
人肺癌细胞;A-427 [A427]
CD7 Others Mouse 小鼠 CD7 人细胞裂解液 (阳性对照)
SV40T转化的人胚肾细胞;293T
MET Others Human 人 c-MET / HGFR (aa 956-1390) 杆状病毒-昆虫细胞裂解液 (阳性对照)
CL-0364HuT 78(人T淋巴细胞白血病细胞)5×106cells/瓶×2
HSC-T6, 大鼠肝星状细胞系 人绒癌细胞VP16耐药株TNFa转染,JEG-3/VP16-TNFa细胞 7F2(小鼠杂交瘤细胞)
人肺癌细胞;A-427 [A427]
CD7 Others Mouse 小鼠 CD7 人细胞裂解液 (阳性对照)
抗人fusion单抗杂交瘤细胞;1F4E6A2*FCGR2B Others Human 人 CD32b / FCGR2B 人细胞裂解液 (阳性对照)
脑静脉血管平滑肌细胞Many types of cells包装:5 × 105次方(1ml)
NRK-49F 大鼠正常肾成纤维细胞
豹猫肺成纤维样细胞;LCL3
CNE1, 人鼻咽癌细胞系
人纤维肉瘤细胞;HT-1080 大鼠肠平滑肌细胞*培养基 100mL
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