产品属于:
产品名称:小肠平滑肌细胞
产品规格:5×105
货号:FS-01X9798
产品类型:原代细胞
单位:T25/瓶
提供细胞鉴定:提供免疫荧光鉴定报告
保存培养温度(℃):37
运输温度(℃):常温
细胞培养的优点:
1.研究的对象是活细胞 在实验过程中,根据要求可始终保持细胞活力,并可长时间监控、检测甚至定量评估一部分活细胞的情况,包括活细胞的形态、结构、生命活动等。 2.研究条件可以人为控制 pH、温度、氧气、二氧化碳、张力等物理化学的条件,可以根据实际需要进行人为的控制,同时,可以施加化学、物理、生物等因素作为条件而进行实验观察,这些因素同样可以处于严格控制之下。 3.研究的样本可以达到比较均一性 通过细胞培养一定代数后,所得到的细胞系则可以达到均一性而属于同一类型的细胞,需要时,可采用克隆化等方法使细胞达到纯化。 4.研究内容便于观察、检测和记录 采用各种研究技术:如倒置生物显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标记等各种仪器设备。 |
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
注意事项:
1. 接收到细胞,肉眼观察细胞培养基颜色,显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收到时的培养瓶拍一张照片,显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张)。 2.用75%的酒精消毒(建议配置75%的酒精的水是灭菌过的)。 3.严格无菌操作,打开细胞培养瓶。 4.将细胞培养瓶内的培养基用吸管*吸出(严禁直接倾倒),放入另一无菌容器中(建议换新的培养基培养细胞)。 5.用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%-EDTA1-1.5ml,显微镜下观察细胞变圆,轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落,加入终止液终止。 6.1000rpm,5min离心,重悬细胞。 7.换新的细胞培养瓶,37℃,5%CO2培养。 |
实验报告:
一、分离与培养:
1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小;
2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置;
3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化;
4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养;
5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养;
二、免疫荧光鉴定:
1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min;
2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min;
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜;
5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h;
6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。
小鼠高铁血红蛋白(MHB)ELISA试剂盒 英文名称:Mouse Methemoglobin,MHB ELISA Kit 规格:96T/48T
小鼠Ⅰ型胶原C端(CTX-Ⅰ)ELISA试剂盒 英文名称:Mouse C-telopeptide of type Ⅰ collagen,CTX-Ⅰ ELISA Kit规格:96T/48T
小鼠少突胶质细胞髓鞘糖蛋白抗体(OMgp-Ab)ELISA试剂盒 英文名称:Mouse anti-oligodendrocyte-myelin glycoprotein antibody,OMgp-Ab ELISA Kit规格:96T/48T
小鼠抗核抗体(ANA)ELISA试剂盒 英文名称:Mouse Anti-nuclear Antibody,ANA ELISA Kit规格:96T/48T
小鼠钥孔虫戚血蓝蛋白(KLH)ELISA试剂盒 英文名称:Mouse keyhole limpet hemocyanin,KLH ELISA Kit规格:96T/48T
小鼠解整合样金属蛋白9(ADAM9)ELISA试剂盒 英文名称:Mouse A Disintegrin And Metalloprotease 9,ADAM9 ELISA Kit 规格:96T/48T
小鼠氧化型谷胱甘(GSGS)ELISA试剂盒 英文名称:Mouse oxidizided glutathione,GSGS ELISA Kit规格:96T/48T
小鼠还原型谷胱甘(GSH)ELISA试剂盒 英文名称:Mouse reduced glutathione,GSH ELISA Kit规格:96T/48T
小鼠肌钙蛋白T(Tn-T)ELISA试剂盒 英文名称:Mouse Troponin T,Tn-T ELISA Kit规格:96T/48T
小鼠c-fos ELISA试剂盒 英文名称:Mouse c-fos ELISA Kit 规格:96T/48T
小鼠c-jun ELISA试剂盒 英文名称:Mouse c-jun ELISA Kit 规格:96T/48T
小鼠抗透明带抗体(aZP)ELISA试剂盒 英文名称:Mouse anti-zona pellucida antibody,aZP ELISA Kit规格:96T/48T
小鼠粘蛋白/粘液7(MUC7)ELISA试剂盒 英文名称:Mouse Mucin-7,MUC7 ELISA Kit规格:96T/48T
小鼠嗜性粒细胞阳离子蛋白(ECP)ELISA试剂盒 英文名称:Mouse eosinophil cationic protein,ECP ELISA Kit 规格:96T/48T
小鼠Qa淋巴细胞抗原2(Qa-2)ELISA试剂盒 英文名称:Mouse Qa lymphocyte antigen 2 region,Qa-2 ELISA Kit规格:96T/48T
小鼠D-乳脱氢(D-LDH)ELISA试剂盒 英文名称:Mouse D-Lactate Dehydrogenase,D-LDH ELISA Kit 规格:96T/48T
小鼠孕受体(PROGR)ELISA试剂盒 英文名称:Rat Progesterone receptor,PROGR ELISA Kit规格:96T/48T
小鼠β连环蛋白/联蛋白(β-Cat)ELISA试剂盒 英文名称:Mouse β-catenin,β-cat ELISA Kit规格:96T/48T
小肠平滑肌细胞Mkl1/MRTF-A myocardin相关转录因子抗体规格: 0.2ml
Dlx5 同源转录因子DLX5抗体规格: 0.2ml
FXR2 脆性X相关蛋白2抗体规格: 0.2ml
PLC β1/Phospholipase C beta 1 磷酯Cβ1抗体规格: 0.2ml
EHZF/ZN521 锌指蛋白521抗体规格: 0.1ml
hnRNP R 异质性核糖核蛋白R规格: 0.2ml
AKAP5 A激锚定蛋白5抗体规格: 0.2ml
CLCN3/CLC-3 氯离子通道蛋白3抗体规格: 0.2ml