实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
特别提示:本公司的所有产品仅可用于科研实验,严禁用于临床医疗及其他非科研用途!
产品名称 | 英文名称 | 规格 | 货号 |
溶血隐秘杆菌PCR荧光定量检测试剂盒 | Arcanobacterium haemolyticumPCR | 多种规格 | BJ-P6381 |
特点:
1. 即开即用,用户只需要提供病毒样品。
2. 根据鲍疱疹样病毒保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量 PCR 检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
6. 本产品只适用于科研,不能用于临床诊断。
储存条件:-20℃以下,有效期12个月。
二、操作步骤 1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。 10×PCR buffer 5μl dNTP mixl 4μl 引物1(10pM) 2μl 引物2(10PM) 2μl Taq酶(2U/μl) 1μl DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl 加ddH2O至 50 μl 视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。 2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。 3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。 4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。 | 三、注意事项 1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。设立一个专用的PCR实验室。 2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。 3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。 4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。 5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。 6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。 7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
|
操作流程
1. 整个检测过程应严格按照本说明书要求分别在试剂准备区、样本处理区和PCR扩增区进行操作,各区实验服、仪器 、耗材应独立使用,不能混用;实验用吸头采用带滤芯吸头;样本处理区应配有生物安全柜,样本处理在生物安全柜中进行操作;三个区应该配有紫外线杀菌装置。
2. 为避免RNA降解,样本处理过程应在0-4℃条件下操作,且完成实验后立即上机检测;样本处理过程中使用的器具耗材应经过无核酶处理。
3. 每次实验应该设置阴、阳性对照。
4. 所有试剂在使用应该在常温下充分融化混匀,并应瞬时离心。
5. 试剂盒内所配阴性和阳性对照在一次使用应全部转移至标本准备区,并单独存放。
6. 为防止荧光干扰,应避免裸手直接接触PCR反应管,并应避免在PCR反应管上进行任何标记。
7. 仪器 扩增相关参数应按照本说明书相关要求进行设置;不同批号试剂不能混用。
8. ABI系列荧光定量PCR仪参数设置中不选ROX校正,淬灭基因选择None。
9. 实验过程中产品的废弃物应该进行无害化处理后方可丢弃。
大鼠精原干细胞5×10⁵Cells/T25培养瓶
乳腺癌成纤维细胞5×10⁵Cells/T25培养瓶
小鼠骨髓单核细胞5×10⁵Cells/T25培养瓶
大鼠淋巴结淋巴细胞5×10⁵Cells/T25培养瓶
乳腺癌血管周细胞5×10⁵Cells/T25培养瓶
小鼠海绵体内皮细胞5×10⁵Cells/T25培养瓶
大鼠脉络膜微血管内皮细胞5×10⁵Cells/T25培养瓶
椎间盘纤维环细胞5×10⁵Cells/T25培养瓶
小鼠骺软骨细胞5×10⁵Cells/T25培养瓶
大鼠胚肺成纤维细胞5×10⁵Cells/T25培养瓶
溶血隐秘杆菌PCR荧光定量检测试剂盒突触蛋白Ⅲ(SYN3)ELISA试剂盒 Synapsin III(SYN3)ELISA Kit
突触蛋白Ⅱ(SYN2)ELISA试剂盒 Synapsin II(SYN2)ELISA Kit
突触蛋白Ⅰ(SYN1)ELISA试剂盒 Synapsin I(SYN1)ELISA Kit
透明质酸结合蛋白1(HABP1)ELISA试剂盒 Hyaluronan Binding Protein 1(HABP1)ELISA Kit
透明质酸合酶3(HAS3)ELISA试剂盒 Hyaluronan Synthase 3(HAS3)ELISA Kit
透明质酸合酶2(HAS2)ELISA试剂盒 Hyaluronan Synthase 2(HAS2)ELISA Kit
透明质酸合酶1(HAS1)ELISA试剂盒 Hyaluronan Synthase 1(HAS1)ELISA Kit
头蛋白(NOG)ELISA试剂盒 Noggin(NOG)ELISA Kit
酮戊二酸脱氢酶(OGDH)ELISA试剂盒 Oxoglutarate Dehydrogenase(OGDH)ELISA Kit
酮戊二酸受体1(OXGR1)ELISA试剂盒 Oxoglutarate Receptor 1(OXGR1)ELISA Kit