培养操作步骤:
1.公司仅用于科研用盖片镊将盖玻片自75%乙醇中取出,用无菌丝绸布擦拭干净,不要用纱布;
2.将盖玻片轻轻放入6孔培养板(每孔一片)或培养皿中(每个平皿可放置2-3片);
3.在距离紫外灯直射范围内20-30 厘米处照射2-3小时;
4.将经过计数的细胞悬浮液移入培养板中,使盖玻片*浸在培养液中;
5.将培养板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,当贴壁细胞生长至覆盖培养板底部2/3面积时,将培养板取出,用盖片镊轻轻取出盖玻片,用蒸馏水漂洗后即可进行快速固定以及免疫细胞化学检测。
中文名称:伊红染液
英文名称:
产品规格:100ml
货号:FS-X9800
产品介绍:
伊红为一种红色的酸性染料,可将细胞质和细胞间质染为粉红色。水溶性伊红组织学上用于上皮细胞、肌肉纤维和细胞浆染色。微生物学实验中,用于鉴别产酸性细菌的一种培养基添加剂。 染色的时间长短需依据:染剂对细胞、组织的染色作用,室温条件,涂片厚薄等进行调节。所以在染色时必须使用显微镜观察染色程度以利掌握时间。 操作方法 1. 涂片放空气中自然干燥,甲醇固定5 分钟,自来水小水流洗去固定液。 2. 滴加伊红染液染色2 分钟,流水洗去多余染液,滤纸吸干水分,镜检。 3. 镜检结果:胞浆呈红色,红细胞呈桔红色,其它成分呈深浅不同红色。 储存:室温避光,有效期一年。 |
实验报告:
一、分离与培养: 1、无菌条件下,取出1-3d 龄SD大鼠心房组织,然后用PBS将此组织块清洗2次,最后将组织剪成1mm3左右大小; 2、往组织块中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型胶原酶),混悬10s,置37℃条件下消化10min,之后用滴管吹打制成单细胞悬液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置; 3、剩下的组织再加入3~4mL酶消化液,混悬10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置,重复此步骤2-3次,直至组织*被消化; 4、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液,1200r/min 离心10min,弃去上清,沉淀细胞用含有10% FBS DMEM/F12培养基混悬,接种于25cm2培养瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培养箱中培养; 5、差速贴壁1h后,吸出培养基,按实验需要接种于6孔板中继续培养; | 二、免疫荧光鉴定: 1、待心房肌细胞生长至80%融合时,弃去培养基,用温育的PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min; 2、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在4℃条件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS冲洗细胞2次,每次10min,然后在室温条件下,用4% BSA封闭细胞30min; 4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗,然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜; 5、PBS冲洗细胞3次,每次10min,按1:150的比例稀释抗α-actin的二抗, 37℃条件下放置1h; 6、用PBS冲洗3次,每次10min,最后在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。 |
分泌型卷曲相关蛋白4(SFRP4)英文名:SFRP4 分裂周期蛋白7抗体包装500mg
分泌型卷曲相关蛋白2(SFRP2)英文名:SFRP2 磷化分裂周期蛋白25抗体包装1g
分泌型卷曲相关蛋白1(SFRP1)英文名:SFRP1 分裂周期蛋白25B抗体包装5g
分泌粒蛋白Ⅱ(SCG2)英文名:SCG2 磷化CD244抗体包装250g
肺部激活调节趋化因子(PARC)英文名:PARC 神经元电压门控钙通道γ3/L-type Ca++CP γ3抗体包装50g
腓骨蛋白7(FBLN7)英文名:FBLN7 3号染色体开放阅读框25抗体包装1g
肥胖抑制(OB)英文名:OB 转录激活因子MYB抗体包装1g
肥大细胞类糜蛋白1(CMA1)英文名:CMA1 阳离子通道相关蛋白1抗体包装1g
防御β2(DEFβ2)英文名:DEFβ2 1号染色体开放阅读框222抗体包装1g
防御β1(DEFβ1)英文名:DEFβ1 2号染色体开放阅读框15抗体包装1g
防御α5(DEFα5)英文名:DEFα5 骨架相关蛋白4抗体包装25g
防御α1(DEFα1)英文名:DEFα1 肌肽二肽1抗体包装5g
芳香烃受体核转位因子(ARNT)英文名:ARNT 性线粒体肌激抗体包装10g
芳香烃受体(AhR)英文名:AhR 碳酐相关蛋白8抗体包装25g
泛结合E2A(UBE2A)英文名:UBE2A 钙通道电压依赖性β1蛋白抗体包装5g
大肠埃希菌Escherichia│coli 质量规格:≥930μg/mg,BR,可用于培养载脂蛋白A1试剂盒8-氧黄连碱 ;
: Vi-1,8382资源名称: 伤门氏菌 质量规格:效价测定运状腺蛋白/前白蛋白试剂盒异泽兰黄;Eupatilin
大肠埃希氏菌Escherichia│coli 质量规格:纯度大于97%含量84.0-102%,USP30孕烯试剂盒异橙黄;Isosinensetin;3
伊红染液停乳链球 1-Boc-2-基吡咯烷丝蛋白抑制因子1
黑曲霉 5-溴-2-甲氧基苯甲松弛肽2;松弛2
黑曲霉变种 N-乙基琥珀酰亚UDP葡糖基转移1家族多肽A1
葡枝根霉 2-甲氧羰基-5-苯磺酰登革热病NS1抗原
玫瑰绿色链霉 1,2,3,4-四氢异喹啉-6-金属肽含血小板反应蛋白13
根瘤 9-癸烯C1q肿瘤坏死因子相关蛋白9
荧光假单胞 4,8-双(5-(2-丁基辛基)噻吩-2-基)苯并[1,2-b:4,5-b']二噻吩抗人类缺陷病抗体
金黄色葡萄球 4-氨基-5-溴嘧啶硫肝糖蛋白
红酵母属 3-溴邻苯二酚纤维蛋白原抗体
双歧双歧杆 2-氨基-5-羟基嘧啶N末端B型钠尿肽
土曲霉 3-溴-4-羟基辅Q10
膜醭毕赤酵母 4-溴-3-羟基酮
球毛壳 6-溴-7-氮杂心脏肌球蛋白结合蛋白C
Bacillus tequilensis 油泛交叉反应蛋白
大肠杆 三甘单丁可溶性白抗原-E
操作规程
1、在96孔板加入细胞100μL/孔,通常细胞增殖实验每孔加入100微升2000个细胞,细胞毒性实验每孔加入100微升5000~10000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目,需根据细胞的大小,细胞增殖速度的快慢等决定)。置37℃ 5%CO2细胞培养箱培养24小时.
2、.加入适当浓度的0~10μL 受试化合物。
3、将96孔板在37℃,含5% CO2空气及100%湿度的细胞培养箱中孵育适当时间。
4、将5×MTT 用稀释液稀释成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小时,使MTT 还原为甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板摇床摇匀。
7、酶标仪在570nm 波长处检测每孔的光密度(如无570nm 滤光片,可以使用560-600nm 的滤光片)。
8、结果分析
a、细胞的存活率:将各测试孔的OD 值减去本底OD 值(*培养基加MTT,无细胞)或空白药物孔OD 值(*培养基加受试药物的不同稀释度加MTT,无细胞),各重复孔的OD 值取平均数±SD。细胞的存活率以T/C%表示,T 为加药细胞的OD 值,C 为对照细胞的OD 值。细胞存活率% =(加药细胞OD/对照细胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 时的药物浓度(IC50)及T/C = 10%时的药物浓度(IC90)