使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
产品名称 | 石斛探针法PCR鉴定试剂盒价格 |
英文名称 | Herba dendrobii |
货号 | YSP9132 |
PCR的反应条件：
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
◇ 循环次数
根据模板DNA的量以及扩增片段的大小，设定25～30个循环。
如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，则会出现Smear。
◇ Anneal以及Extension
合适的Anneal温度通常在45～68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外，由于在60～68℃间，也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时，每kbp大体可设定30秒～1分钟；当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常，Anneal温度太高，有时会得不到扩增产物；Anneal温度太低时，容易发生非特异性反应。另外，Extension时间太短时，会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成；而Extension时间太长时，会出现Smear。
饱和苦味缓冲液酰基异香酚 ≥98%, FCC植酸钠anti- NA14 antibody
anti- NAB2 antibody
肌氨酸氧化酶酸异龙脑酯 90%二酰亚胺anti- NADK antibody
anti- NAGA antibody
N-基酸酯盐酸盐位紫罗兰酮 97%叔醇钾anti- NAGK antibody
anti- NAGS antibody
N-基酸酯盐酸盐异基紫罗兰酮70 60-70%耐晒红BBSanti- NANOG antibody
anti- NANOS3 antibody
N-基甘氨酸酸异戊酯 93%永固橙RLanti- NANS antibody
anti- NAP1L1 antibody
皂苷酸异戊酯 mixture of isomers, ≥97%, FG金光红NCanti- NAP1L4 antibody
anti- NAPB antibody
三氧化二钐苯酸异戊酯 97%颜料黄anti- NAPG antibody
anti- NAPRT1 antibody
柳酸2-基酸异酯 Kosher, ≥98%耐晒黄anti- NAPRT1 antibody
anti- Napsin A antibody
N-水杨酰苯胺茉莉净油 耐晒黄Ganti- NARF antibody
anti- NARFL antibody
邻羟基苯醛肟茉莉酮 98%耐晒深红BBManti- NARFL-Specific antibody
anti- NARG1 antibody
石斛探针法PCR鉴定试剂盒价格HUM, 正常人主动脉平滑肌细胞E-Cad(Human E-Cadherin) ELISA Kit 人E钙粘着蛋白/上皮性钙黏附蛋白NOLIMITS 7000BP DNA FRAGMENT
HAVSMC, 人主动脉平滑肌细胞E-Cad ELISA Kit 大鼠E钙黏蛋白/上皮钙黏蛋白NOLIMITS 10000BP DNA FRAGMENT
LX-2, 人肝星形细胞株EB-VCA IgM EB 病毒 IgM(间接法二步法)NOLIMITS 25BP DNA FRAGMENT
3T3-L1, 小鼠前脂肪细胞EB-VCA IgG EB 病毒 IgG(间接法二步法)NOLIMITS 17000BP DNA FRAGMENT
肿瘤细胞EBV(Human anti-Epstein-Barr virus antibody) ELISA Kit 人抗EB病毒抗体RiboRuler High Range RNA Ladder
MCF-7（MCF7）（ATCC来源）, 人癌细胞EBv IgM(Human epstein-barr virus IgM) ELISA Kit 人EB病毒IgMRiboRuler High Range RNA Ladder, ready-to-use
MDA-MB-231（ATCC来源）, 人癌细胞EBv IgG(Human epstein-barr virus IgG) ELISA Kit 人EB病毒IgGRiboRuler Low Range RNA Ladder
Raji，人Burkitt's淋巴瘤细胞EBv IgA(Human epstein-barr virus IgA) ELISA Kit 人EB病毒IgARiboRuler Low Range RNA Ladder, ready-to-use
Saos-2，人成骨肉瘤细胞EBMZ(Human epidermal basement membrane zone) ELISA Kit 人抗表皮细胞基底膜抗体M13/pUC sequencing primer (-20), 17-mer
Caco-2，人结直肠腺癌细胞EAR3(Human eosinophil-associated ribonuclease A family member 3)ELISA Kit 人嗜酸性白血球相关之RNA水解酵素家族成员3M13/pUC Reverse Sequencing Primer (-26), 17-mer
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，Z后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR
