50次 天南星染料法PCR鉴定试剂盒说明书 基因扩增仪

使用方法:
一、样品 DNA 的制备
用自选方法提取 Cps DNA。注意：DNA 纯化方法是决定检测灵敏度的关键因素。如果不能很好纯化样品 DNA，后面的 PCR 再灵敏也不能提高整体检测灵敏度。
二、制备 Cps 标准曲线（以 10-10E6 这 6 个 10 倍稀释度为例。由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体病毒做阳性对照，只提供没有传染性的、可以直接使用的 DN**段作为阳性对照。
1. 标记 6 个离心管，分别为 6，5，4，3，2 和 1 号。
2. 用带芯枪头分别加入 45 μL 超纯水（用带芯枪头，下同）。
3. 先将本试剂盒提供的阳性对照用 TE 缓冲液或超纯水 10 倍梯度稀释到10E7 拷贝/μL（注：请不要将本试剂盒提供的标准品一次性稀释至 10E7拷贝/μL，建议每次稀释 10 倍，梯度稀释至 10E7 拷贝/μL）。
4. 在 6 号管中加入 5 μL 10E7 拷贝/μL 的 Cps 阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡 1 分钟，得 10E6 拷贝/μL 的阳性对照。
5. 换枪头，从 6 号管中取 5 μL 溶液到 5 号管中，充分震荡 1 分钟，得 10E5拷贝/μL 的阳性对照。
6. 换枪头，从 5 号管中取 5 μL 溶液到 4 号管中，重复上面的操作直到得到 6个稀释度的阳性对照。
7. NC 管中不加任何阳性对照。
8. 从 1-6 号管中分别取 5 μL 和待测样品一起进行定量 PCR（见下步），每个样品做 3 次重复。PCR 后得到每个阳性对照稀释样品的荧光 PCR Ct 值，并以之为纵轴，以浓度的对数值为横轴，绘制标准曲线。
储存条件：
仅用于科研14℃或－20℃样品收集、处理及保存方法
1. 血清：使用不含热原和内毒素的试管，操作过程中避免任何细胞刺激，收集血液后，3000 转离心10 分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
2. 血浆：EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000 转离心30 分钟取上清。
3. 细胞上清液：3000 转离心10 分钟去除颗粒和聚合物。
4. 组织匀浆：将组织加入适量生理盐水捣碎。3000 转离心10 分钟取上清。
5. 保存：如果样本收集后不及时检测，请按一次用量分装，冻存于-20℃，避免反复冻融，在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。

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PCR的反应条件：
因扩增片段的大小、反应体积、使用扩增仪器的不同而不同。
◇ 循环次数
根据模板DNA的量以及扩增片段的大小，设定25～30个循环。
如果循环次数太少，扩增量不足；如果循环次数太多，则会出现Smear。
◇ Anneal以及Extension
合适的Anneal温度通常在45～68℃之间 (预备实验可2℃间隔进行)。另外，由于在60～68℃间，也有很高的活性, 因此可在此温度范围内设定Anneal-Extension温度, 进行2 Step PCR。Anneal-Extension温度为68℃ 时，每kbp大体可设定30秒～1分钟；当温度设定在68℃以下时, 时间设定可稍长一些。通常，Anneal温度太高，有时会得不到扩增产物；Anneal温度太低时，容易发生非特异性反应。另外，Extension时间太短时，会得不到扩增产物或者会有一些短的非特异性产物优成；而Extension时间太长时，会出现Smear。
(1S,2S)-2-(二苯基膦)环己胺 97%Geniposide；京尼平苷/栀子苷柴胡颗粒Rat N-MID-OT(N-MID Osteocalcin) ELISA Kit

Rat Hepc 25(Hepcidin 25) ELISA Kit

(1S,2S)-(-)-1, 2－二苯基－1, 2－二胺 98%Potassium sorbate；山梨酸钾馒头改良剂Rat Estrogen ELISA Kit

Rat Estrone(Estrone) ELISA Kit

(1S,2S)-N-(对苯磺酰)-1,2-二苯基二胺 98%Senegenin；远志皂苷元五香粉Rat E2(Estradiol) ELISA Kit

Rat HCY(Homocysteine) ELISA Kit

(1S,2S)-(+)-N,N'-二基环己烷-1,2-二胺 98%Leonurine hydrochloride；盐酸益母草碱咖喱粉Rat GAGs(Glycosaminoglycan) ELISA Kit

Rat TGFBR1(TGF-beta receptor type-1) ELISA Kit

(1S,2S)-(-)-1,2-环己二胺D-盐 98%Econazole nitrate；硝酸益康唑白胡椒粉Rat TGFBR2(TGF-beta receptor type-2) ELISA Kit

Rat DCP(Des-gamma carboxyprothrombin) ELISA Kit

(S,S)-2,6-双(4-异基-2-恶唑啉-2-基)吡啶 99%Bisdemethoxycurcumin；双去氧基姜黄素复配肉制品水分保持剂Rat FBXO32(F-box only protein 32) ELISA Kit

Rat 3-MH(3-methylhistidine) ELISA Kit

(S,S)-N-(对苯磺酰)-1,2-二苯烷二胺(对异基苯)钌(II) Butylated Hydroxyanisole/BHA；基羟基茴香醚复配肉制品水分保持剂Rat MTOR(Serine/threonine-protein kinase Mtor) ELISA Kit

Rat MTL5(Tesmin) ELISA Kit

二酰基[(S)-(-)-2,2'-双(二-P-苯基酰)-1,1'联萘]钌 95%Neoagarohexaose；新琼六糖三黄散Rat CK-18/KRT18(CytokeRatin 18) ELISA Kit

Rat ENK(enkephalin) ELISA Kit

2,2′:6′,2′′-三吡啶 98%Doxorubicin hydrochloride；盐酸阿霉素情散Rat IL1RL1(IL-1 Receptor Like 1) ELISA Kit

Rat CTRP15(Complement C1q tumor necrosis factor-related protein 15) ELISA Kit

三基 97%Kanamycin mono sulfate；硫酸卡那霉素冰糖雪梨香精Rat Acan(Aggrecan core protein) ELISA Kit

Rat AP12(Apelin 12) ELISA Kit
天南星染料法PCR鉴定试剂盒说明书β-肌动蛋白抗体纳米铁粉 99.9%，50nm2-[(三(羟基)基)]-1-磺酸钠pUNO1-hTRAILa

促肾上腺皮质激素抗体纳米铁粉 99.9%，80nmTris磺酸pUNO1-hTRAM

肌动蛋白α抗体苯酮 GCS,≥99.5% (GC)地霉素pUNO1-hTRANCEa

神经丝蛋白抗体铵 AR,99.0%松油醇pUNO1-hTRANCEb

整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型1--2-萘酚-4-磺酸 ACS reagent, ≥98%三基酸盐pUNO1-hTREM1

整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-7茜素络合指示剂 高纯级,98%四甘醇pUNO1-hTREM2

内收蛋白抗体茜素络合指示剂 Indicator三撑二胺pUNO1-hTREML2

脂肪组织分化相关蛋白抗体烯腈 Standard for GC(剧)硬脂酸酯pUNO1-hTREML4

脂联素受体-1抗体邻苯酸 Standard for GC, ≥99.5% (GC)基三铵pUNO1-hTREX1a

脂联素受体-2抗体1,4-炔二醇  Standard for GC, ≥99.5% (GC)四铵pUNO1-hTRIAD3a
实验注意事项：
1）RT-PCR可以检测组织、细胞、血液、细菌等很多材料，不同的样本有不同要求，实验前请充分沟通确认实验方案和样本情况；
2）客户尽可能提供实验的背景信息、物种、基因准确的名称和ID号；
3）客户尽量不要提供DNA或RNA样品。
4）样本保存于液氮或干冰，也可以保存于Trizol液中。
实时荧光定量PCR（quantitative real-time PCR，qPCR）是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，Z后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。实时荧光定量PCR的化学原理包括探针类和非探针类两类，探针类是利用与靶细胞序列特异性杂交的探针来指示扩增产物的增加，非探针类是利用荧光染料或者特异性设计的引物来指示扩增的增加。运用该技术可以对DNA、RNA样品进行定量（包括定量和相对定量）和定性分析。
主要服务：DNA或RNA的定量分析、基因表达差异分析、基因分型。
主要技术：引物设计、RNA提取、cDNA合成、qPCR