组成及试剂配制:
1、嗜肺军团杆菌(LP)核酸检测试剂盒图片品牌酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
产品名称 | 英文名称 | 价格 |
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样本采集、存放及运输:
1、样本采集:各类型样本按照常规方法采集;
2、存放:样本在2~8℃条件下保存应不超过72h,-70℃以下可长期保存,但应避免反复冻融(多冻融3次);
3、运输:采用泡沫箱加冰密封进行运输。
【标本要求】
人体鼻腔或咽部分泌物:用无菌捻拭子拭取鼻腔或咽部分泌物,将分泌物或咽拭子置入无菌玻璃管(含0.4ml灭菌生理盐水),用无菌棉球将试管塞紧后,密闭送检。标本可立即用于检测,也可保存于-20℃待测。
【检验方法】
1.标本、对照品的核酸裂解处理
用商品化(取得医疗器械许可证)的RNA提取试剂盒处理标本,具体操作参见该试剂盒说明书。
或用Trizol法提取,方法如下:取100?l样品置于1.5ml 离心管中,加入300?l裂解液(Trizol),再加入100, 混匀器上振荡混匀5sec或颠倒混匀15次; 13000rpm离心15min, 吸取上层液体,加入等体积异丙醇,颠倒混匀室温静置10min, 13000rpm离心10min,轻轻倒去上清;加入700?l 75%乙醇,颠倒洗涤,13000rpm离心5min,轻轻倒去上清,倒置于吸水纸上,弃尽液体或4000rpm离心5sec,将管壁上的残余液体甩到管底部,用微量加样器尽量吸干液体,加入20?l DEPC-H2O溶解RNA。
2.试剂配制
取n×19?l H7N9核酸荧光PCR检测混合液与n×1?l RT-PCR酶(n为反应管数),振荡混匀数秒, 3000rpm离心数秒。
3.加样取上述混合液20?l置于PCR管中,然后将样品核酸提取液、DEPC-H2O、阳性对照品各5?l分别加入PCR管中,盖好管盖,立即进行PCR扩增反应。
4. PCR扩增反应管置于定量荧光PCR仪上,推荐循环参数设置:
45℃×10min; 95℃×15min;循环一次,再按95℃×15sec→60℃×60sec,循环45次;单点荧光检测在60℃,反应体系为25?l。
荧光通道检测选择:选用FAM通道。
ODC ELISA Kit磷酸化相关死亡促进因子抗体鸟氨酸脱羧酶(ODC)ELISA试剂盒
OCT ELISA Kit人β亚基人绒毛膜促性腺激素抗体鸟氨酸氨基甲酰转移酶(OCT)ELISA试剂盒
FAK ELISA Kit钙激活钾通道蛋白 α 1抗体黏着斑激酶(FAK)ELISA试剂盒
MAdCAM-1 ELISA Kit钙激活钾通道蛋白 α 1抗体黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)ELISA试剂盒
ERP29/C12orf8/ERP28 ELISA Kit蛇毒巴曲酶抗体内质网蛋白29(ERP29/C12orf8/ERP28)ELISA试剂盒
visfatin ELISA KitBH3结构域凋亡诱导蛋白抗体内脂素/内脏脂肪素(visfatin)ELISA试剂盒
visfatin ELISA KitBax抗体内脂素(visfatin)ELISA试剂盒
vaspin ELISA KitBcl-2抗体内脏脂肪特异性丝氨酸蛋白酶抑制剂(vaspin)ELISA试剂盒
GC ELISA Kit脑源神经营养因子抗体内源性糖皮质激素(GC)ELISA试剂盒
esRAGE ELISA Kit碱性成纤维细胞生长因子抗体内源性分泌型糖基化终产物受体(esRAGE)ELISA试剂盒
EL ELISA Kit癌转移抑制基因1抗体内皮脂肪酶(EL)ELISA试剂盒
ES ELISA Kit牛血清白蛋白抗体内皮抑素(ES)ELISA试剂盒
eNOS-3 ELISA Kitβ-酪蛋白抗体内皮型一氧化氮合酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒
eNOS ELISA Kitβ葡聚糖受体抗体内皮型一氧化氮合酶(eNOS)ELISA试剂盒
eNOS-3 ELISA Kit蛇毒蛋白巴曲酶抗体内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒
eNOS ELISA Kit非受体性蛋白酪氨酸激酶ETK抗体内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)ELISA试剂盒
ESM-1 ELISA Kit磷酸化非受体性蛋白酪氨酸激酶ETK抗体内皮细胞特异分子-1(ESM-1)ELISA试剂盒
ENG/CD105 ELISA Kit磷酸化相关死亡促进因子抗体内皮糖蛋白(ENG/CD105)ELISA试剂盒
EDN2 ELISA KitBarX1蛋白抗体内皮素2(EDN2)ELISA试剂盒
EDNRA ELISA Kitβ1,3半乳糖转移酶3抗体内皮素1受体(EDNRA)ELISA试剂盒
ET-1 ELISA Kit红细胞阴离子交换蛋白1抗体内皮素1(ET-1)ELISA试剂盒
ET-1 ELISA Kit脑特定蛋白Brn3B抗体内皮素(ET-1)ELISA试剂盒
EM-2 ELISA KitBcl-2同源结构域蛋白抗体内吗啡肽-2(EM-2)ELISA试剂盒
EM-2 ELISA Kit骨形态发生蛋白4抗体内吗啡肽2(EM-2)ELISA试剂盒
EG-VEGF ELISA Kit脑和急性白血病胞浆蛋白抗体内分泌腺来源的血管内皮生长因子(EG-VEGF)ELISA试剂盒
ET ELISA Kit骨髓基质干细胞抗原抗体2抗体内毒素(ET)ELISA试剂盒
BDNF ELISA Kit组蛋白相关Bmi1抗体脑源性神经营养因子(BDNF)ELISA试剂盒
BDNF ELISA Kit癌转移抑制基因1抗体脑源性神经生长因子(BDNF)ELISA试剂盒
BNP ELISA Kit大脑富含鸟苷酸激酶相关蛋白抗体脑钠素/脑钠尿肽(BNP)ELISA试剂盒
BNP ELISA Kit脑富含膜附着信号蛋白1抗体脑钠素(BNP)ELISA试剂盒
NGB ELISA Kit卵黄状黄斑病蛋白3抗体脑红蛋白(NGB)ELISA试剂盒
ENK ELISA Kit卵黄状黄斑病蛋白抗体脑啡肽(ENK)ELISA试剂盒
Ghrelin ELISA Kit卵黄状黄斑病蛋白4抗体脑肠肽(Ghrelin)ELISA试剂盒
BGP/Gehrelin ELISA Kit炭疽杆菌菌体蛋白抗体脑肠肽(BGP/Gehrelin)ELISA试剂盒
CYT Ab ELISA KitEBV立即早期基因BRLF1抗体囊虫病抗体(CYT Ab)ELISA试剂盒
TOXB ELISA Kit脑表达X连锁蛋白4抗体难辨梭状芽孢杆菌毒素B(TOXB)ELISA试剂盒
TOXA ELISA KitB淋巴细胞新型蛋白1抗体难辨梭状芽孢杆菌毒素A(TOXA)ELISA试剂盒
SLC6A6/TAUT ELISA Kit核突触蛋白β抗体钠-氯化物依赖性牛磺酸转运体(SLC6A6/TAUT)ELISA试剂盒
Smad 4 ELISA KitBTRC2蛋白抗体母亲DPP同源物4(Smad 4)ELISA试剂盒
TdT ELISA KitBEND3蛋白抗体末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)ELISA试剂盒
TCC C5b-9 ELISA KitBEND4蛋白抗体末端补体复合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA试剂盒
ANPEP ELISA KitBEND6蛋白抗体膜内氨酰氨基肽酶(ANPEP)ELISA试剂盒
AnnexinA5 ELISA Kit胎儿阿兹海默病抗原抗体/核小体重塑因子抗体膜联蛋白A5(AnnexinA5)ELISA试剂盒
ANX-Ⅶ ELISA Kit巴尔得-别德尔综合征相关蛋白2抗体膜联蛋白Ⅶ(ANX-Ⅶ)ELISA试剂盒
ANX-Ⅵ ELISA Kit巴尔得-别德尔综合征相关蛋白5抗体膜联蛋白Ⅵ(ANX-Ⅵ)ELISA试剂盒
ANX-Ⅴ ELISA Kit巴尔得-别德尔综合征相关蛋白4抗体膜联蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA试剂盒
ANX-Ⅳ ELISA Kit巴尔得-别德尔综合征相关蛋白7抗体膜联蛋白Ⅳ(ANX-Ⅳ)ELISA试剂盒
ANX-Ⅲ ELISA Kit巴尔得-别德尔综合征相关蛋白9抗体膜联蛋白Ⅲ(ANX-Ⅲ)ELISA试剂盒
ANX-Ⅱ ELISA Kit巴尔得-别德尔综合征相关蛋白10抗体膜联蛋白Ⅱ(ANX-Ⅱ)ELISA试剂盒
反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免5个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以低引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。