碳水化合物技术原理方法

碳水化合物试验步骤：

1、贴壁细胞用胰酶消化，离心收集。

2、细胞重悬于冰冷的PBS漂洗一次，离心收集。试验步骤2再重新作一边。

3、加入5mlDNA提取缓冲液，（10mmol/LTris-cl,0.1mol/LEDTA,o.5%SDS）,混匀。

4、加入25ul蛋白酶K,使终浓度达到100ug/ml,混匀，50℃水浴3h,

5、用等体积的酚抽提一次，2500rpm离心收集水相，用等体积的（酚，）混合物抽提一次，2500r/min离心收集水相

6、用等体积的，抽提一次。加入等体积的5mol/L的LiCL,混匀，冰浴，10min.。

7、2500rpm离心10min.转上清于一离心管中。加入等体积的异丙醇。室温10min。2500rpm,离心10min。弃上清。

8、加入0.1倍体积3mol/L乙酸钠（PH5.2）与2倍体积-20℃预冷无水乙醇。-20℃20min。

9、12000r/min,室温离心5min。弃上清。将DNA溶于适量TE中。

碳水化合物技术原理：

(1).抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。

(2).结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性。

(3).酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。

(4).受检标本与固相载体表面的抗原或抗体起反应。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。

(5).此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。

(6).加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。测定方法具有很高的敏感度pg-ng/ml水平，并且重复性好。以免疫学反应为基础，将抗原、抗体的特-反应与酶对底物的催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术