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当前位置：上海邦景实业有限公司>>技术文章>>单抗制备融合后细胞不长或融合后克隆很少的原因
单抗制备为什么融合后细胞不长或者融合后克隆很少？
可以从这几个方面考虑：
1、免疫用的动物品系不正确或者品系不纯。免疫用的动物一般应该与骨髓瘤来源的动物是相同品系，例如使用SP2/0骨髓瘤细胞时应该选用Balb/C小鼠，同时必须使用品系纯正的小鼠。
2、培养基中加入了过高浓度的HAT，或者仅A的浓度过高或HT的浓度过低，建议用纯的骨髓瘤和已有的杂交瘤作HAT浓度筛选。
3、培养基不正确或血清浓度不正确或使用了劣质血清。
4、未正确制备饲养层细胞。参见本站有关饲养层细胞制备的部份。
5、接种杂交瘤细胞的培养板过多。一般在5-20块96孔板为宜。
6、融合后，未及时转移或稀释细胞。有人在做融合后喜欢把融合的细胞先放在培养瓶中培养，然后再滴到96孔板上。如果在培养瓶中培养的时间过长，也可能出现克隆利率少的情况。
7、细胞被污染。在显微镜下仔细观察是否有明显的微生物污染。即使看不到有明显的微生物，也应该考虑是否有支原体污染，有条件的可以做支原体检测。
8、细胞培养条件不正确，确保细胞培养在恒定的37度较湿的环境，同时保证CO2浓度在4-5%左右。
9、其它与融合条件相关的不恰当的因素。
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