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RIPA Buffer配制

时间:2021/12/21阅读:1073
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1.  基础成分

Tris-HCl(缓冲液成分,防止蛋白变性)

NaCl(盐份,防止非特异蛋白聚集)

NP-40(非离子去污剂,提取蛋白;用H2O配制成10%储存液)

去氧胆酸钠(离子去污剂,提取蛋白;用H2O配制成10%储存液;避光保存)

注意:准备激酶(致活酶)实验时,不要加去氧胆酸钠,因为离子型去污剂能够使酶变性,导致活性丧失。
 

2.  RIPA蛋白酶抑制剂

苯甲ji 磺酰氟(PMSF)(用异丙醇配制成200 mM的储存液,室温保存)

EDTA(钙螯合剂;用H2O配制成100 mM的储存液,PH 7.4)

亮抑酶肽(Leupeptin)(用H2O配制成1 mg/ml的储存液,分装,-20℃保存) 

抑蛋白酶肽(Aprotinin)(用H2O配制成1 mg/ml的储存液,分装,-20℃保存)

胃蛋bai 酶抑制剂(Pepstatin)(用甲醇配制成1 mg/ml的储存液,分装,-20℃保存)
 

3.  RIPA磷酸(酯)酶抑制剂

激活的Na3VO4(用H2O配制成200 mM的储存液

NaF(200 mM的储存液,室温保存)

注意:在准备做磷酸(酯)酶实验的时候,不加磷酸酯酶抑制剂。


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