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细胞迁移实验步骤

时间:2023/4/23阅读:427
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  细胞迁移即细胞划痕法,是测定细胞迁移运动与修复能力的方法,类似体外伤口愈合模型。在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上,用微量枪头或其他硬物在细胞生长的中央区域划线,去除中央部分的细胞,然后继续培养细胞至实验设定的时间,取出细胞培养板,观察周边细胞是否生长至中央划痕区,以此判断细胞的生长迁移能力,实验通常需设定正常对照组和实验组,实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等组别,通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力,可以判断各组细胞的迁移与修复能力。

   当细胞长到融合成单层状态时,在融合的单层细胞上人为一个空白区域,称为“划痕"。划痕边缘的细胞会逐渐进入空白区域使“划痕"愈合。

 实验步骤:

1、培养板接种细胞之前先用marker笔在12孔板背面画横线标记(方便拍照时定位同一个视野)。

2、细胞消化后接入12孔板,数量以贴壁后铺满板底为宜(数量少时可培养一段时间至铺满板底)。

3、细胞铺满板底后,用1ml枪头垂直于孔板细胞划痕,尽量保证各个划痕宽度一致。(人工枪头划痕难以保证划痕宽度的一致性,影响实验结果,这也是该方法最大的缺陷)。

4、吸去细胞培养液,用PBS冲洗孔板三次,洗去划痕产生的细胞碎片。

5、加入无血清培养基,拍照记录。

6、将培养板放入培养箱培养,每隔4-6小时取出拍照。

7、根据收集图片数据分析实验结果。


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