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冻干多肽的溶解:
1、溶解多肽的*个原则是使用无菌蒸馏水或去离子水,应溶解在无菌的蒸馏水中或用0.45或0.2孔径的滤膜过滤除菌。含有Cys、Met、Trp的多肽很容易氧化,应溶于无氧的水中,无氧水可通过注入惰性气体(氮、氦、氩)减压除气得到;
2、若多肽不溶于纯水,超声处理有助于打碎颗粒并增加溶解度。
3、若多肽含有多个碱性氨基酸,使用(1-10%)的乙酸水溶液:对于疏水性强的多肽,应使用50%的乙酸;
4、若多肽中含有大量酸性氨基酸,可用氨溶液(1-10%)或乙酸乙基ma 啡或重碳酸盐等挥发性的碱性缓冲液溶解。
5、异丙醇和乙腈能溶解中等大小的多肽。若肽要上柱,有机溶剂的量必须很少否则将严重影响停留时间;
6、若多肽因含有Val、Leu、Met、Phe、Tyr、Ala等芳香链而高度疏水、或为中性肽时,DMF或DMSO等膜变性剂的使用,有利于多肽的溶解:
a.高浓度模变性剂通过破坏多肽的二级结构而助溶;
b.膜变性剂适于多肽分析液的制备,但可能会对其生物活性的研究工作造成干扰;
c.DMF是变性剂(浓度可达30%),滴加至多肽溶解;
d.反相层析法时,DMF将与洗脱液前锋一起流出,根据入量的多少,峰值可能很高。大多数肽能在大量DMF流出后几分钟内流出,若肽链很小,洗脱太早,多肽的量将很低。
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