当前位置:上海邦景实业有限公司>>技术文章>>RNA直接法提取具体操作过程
1)加入1ml Trizol试剂,混匀,冰上孵育10min。
2)4℃,12000rpm离心10min,小心转移上清液到不含颗粒的新EP管中。
3)加入200ul氯仿,剧烈振荡15秒,室温孵育5min。
4)4℃,12000rpm离心15min。混合液分三层,包括最下面的C6H5OH - 氯仿有机相,中间相和上层水相。小心转移上层水相到新的EP管(大约60%体积的Trizol),不要吸取中间相,可留下少量上层液体!(Note:质量比数量更重要!)
5)加入等体积的异丙醇,轻轻地颠倒混匀约10次,室温放置10min。
6)4℃,12000rpm离心10min。弃上清,1ml 75%乙醇洗涤RNA沉淀两次。
7)4℃,12000rpm离心5min,弃上清,室温下风干5-10min(不要太干,过度干燥会导致RNA难溶解!)。将RNA溶于15μl-50μlDEPC水中。
8)立即进行反转录反应,或先-80℃长期保存。
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