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二抗(secondary antibody):直接与靶抗原连接的一抗结合,通常用于标记和检测一抗。二抗可以是完整抗体或抗体片段,如IgG分子、Fab片段以及F(ab’)2片段。
选择二抗时需要考虑的因素:
1、一抗的种属来源:二抗应选用与使用的一抗相同的物种来源。例如,如果一抗是小鼠源的单克隆抗体,二抗则选抗小鼠的二抗(如山羊抗小鼠或兔抗小鼠)。
2、一抗的类别和亚类:二抗需与一抗的类别或亚类相匹配。多克隆抗体主要是IgG类免疫球蛋白,因此相应的二抗就是抗IgG抗体;单克隆抗体由于存在不同的亚型,选择二抗时需要根据一抗的类型或亚类相匹配。
3、实验类型:不同的实验类型可能需要不同类型的二抗。例如,在双标实验中,如果两个一抗分别来自不同的种属,则二抗应选择来自第三种种属的抗体,以避免交叉反应。
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