大鼠角膜基质细胞 返回列表页

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商品属性：

细胞培养步骤:

一.培养基及培养冻存条件准备:

1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。

二. 细胞处理:

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件： 气相：空气，95%；二氧化碳，5%。 温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

牛脂酰辅A脱氢免疫试剂盒进口、组装

细菌琼脂粉 英文名称：Agar Bacteriological 产品规格：250g

猪Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)免疫试剂盒进口、组装

小鼠MAP激活化蛋白激2(MAPKAPK2)免疫试剂盒*直销

兔基质金属蛋白1(MMP-1)免疫试剂盒进口、分装

人血红素氧合1(HO-1)免疫试剂盒*直销

人去乙酰化Sirtuin-2(SIRT2/SIR2L/SIR2L2)免疫试剂盒*直销

人肝脏甘油三脂脂肪(HTGL)免疫试剂盒进口、分装

人γ谷氨酰转移(GGT)免疫试剂ows\system32\EhStorShell.dll

大鼠角膜基质细胞Bovine Cytomegalovirus(BCMV)牛巨  病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Phosphor-CBX5  磷酸化CBX5抗体 规格: 0.2ml

乙型流感Victoria/Yamagata亚型（BV/BY)双重PCR试剂盒 定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Goat Anti-Bovine IgG/Alexa Fluor 350  Alexa Fluor 350标记的羊抗牛IgG 规格: 0.1ml

Avian Infectious Bronchitis Virus(AIBV)禽传染性支气管炎病毒Delaware型探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周FANK1  HSD13蛋白抗体 规格: 0.1ml

Albugo tragopogi向日葵白锈病PCR试剂盒 植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Rabbit anti-MG IgG/Cy7  Cy7标记的兔抗爪沙鼠IgG 规格: 0.1ml

鹧鸪源性成分LAMP试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周TNIK  TRAF2和NCK激相互作用蛋白抗体 规格: 0.2ml

Salmonella heidelberg海德堡沙门氏LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Bcl G/BCL2 like 14  Bcl2样凋亡蛋白14抗体 规格: 0.2ml

Bacillus subtilis枯草芽孢杆探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 1-2周TMEM49  跨膜蛋白49抗体 规格: 0.2ml

Caulis trachelospermi络石藤探针法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周AMPK gamma 3/PRKAG3  苷酸活化蛋白激γ3抗体 规格: 0.2ml

Israeli Acute Paralysis Virus以色列急性瘫痪病毒LAMP试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周ADAM8  去整合素样金属蛋白8抗体 0.2ml

Eurytrema spp.阔盘吸虫通用探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周STAT5  信号转导和转录激活因子5抗体 规格: 0.1ml

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。