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货号 | BJ-X96956 |
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产品名称 | |
规格 | 1×10⁶cells/T25培养瓶 |
货号 | BJ-X96956 |
商品属性:
名称 ACT-1 (甲状腺癌细胞) 生长特性贴壁细胞 生长培养基RPMI-1640+ 13.6 mg/L hypoxanthine 13.6 mg/L hypoxanthine(0.1 mM)+ 0.176 mg/L aminopterin 0.176 mg/L aminopterin(0.4 μM)+ 3.8 mg/L thymidine 3.8 mg/L thymidine(0.016 mM)+ 20% FBS+ 1% P/S 推荐换液频率2~3次/周 冻存条件 冻存液:55% 基础培养基+40%FBS+5%DMSO 温度:液氮 培养条件 气相:空气,95%;CO2,5% 温度:37℃ |
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
人 CD147 / EMMPRIN / Basigin 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
人 BMPR-II 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
人 BMPRIA / ALK-3 / CD292 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
人 BMP-5 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
人 BMP-2 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
人 BCAM 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
小鼠 BACE-1 人细胞裂解液 (阳性对照) (变性)
小鼠 B7-H1 / CD274 / PD-L1 人
ACT-1 (甲状腺癌细胞)1瓶 HL-7702 [L-02]株 HL-7702 [L-02] 低温运输和保存 15.6-1000 pg/mL 人心房肽转化(CORIN)ELISA试剂盒
CHO培养基基础 CHO Medium Base 250g 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Deleted in malignant brain tumors 1 protein
2 ug pGL4.10 pGL4.10 低温运输,-20℃保存 0.156-10 ng/mL 人O6甲基DNA甲基转移(MGMT)ELISA试剂盒
50T 古典猪瘟病毒PCR检测试剂盒 低温运输,-20℃保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Metaxin-3
25mL IEF Sample Buffer,2X,pH 3-10 IEF Sample Buffer,2X,pH 3-10 常温保存 1.56-100 ng/mL 人蛋白激Cε(Protein kinase C epsilon type)ELISA试剂盒
2 ug PiggyBac Dual Promoter PiggyBac Dual Promoter 低温运输,-20℃保存
5mL Ribonuclease A Solution, 10mg/mL Ribonuclease A Solution, 10mg/mL 常温保存 0.312-20 ng/mL 人线粒体[NADP]异柠檬酸脱氢(IDH)ELISA试剂盒
10mL RNase-free 水 RNase-free Water 常温AB琼脂进口、国产Alealine Bile Salt Agar250克分离霍乱弧菌
2 ug pETcoco-2 pETcoco-2 低温运输,-20℃保存 0.156-10 ng/mL 叶绿醌 ( Phylloquinone)ELISA试剂盒
25g 偏钒酸钠 Sodium Metavanadate 室温保存 0.156-10 ng/mL ELISA Kit for Human Sclerostin domain-containing protein 1
20次 一站式TA克隆试剂盒 One-Stop AT Cloning Kit -20℃保存 0.312-20 ng/mL ELISA Kit for Human Advanced glycosylation end product-specific receptor
操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
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