乳腺癌成纤维细胞-上海邦景实业有限公司

货号	BJ-X97524

操作要点：

1）将培养基在37℃水浴锅预热；准备一个15mL无菌的离心管，加入8mL预热培养基。

2）将冻存细胞从液氮罐中取出，快速放入37℃水浴锅中复温（可准备一洁净的烧杯，装满37℃的水，细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内，再逐步转移到水浴锅中）。轻轻晃动冻存管，使细胞能在1~2min内*解冻，使细胞能尽快通过最易受损的温度段（-5~0℃）。注意冻存管管口不能没入水中，BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。

3）用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内，将管内细胞转移至准备好的离心管内，轻轻吹打液体，使细胞均匀分散，降低DMSO浓度，吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次，均转移至离心管内。

4）800rpm离心5min，弃上清，加入新鲜的培养基，吹打制成细胞悬液。

5）将细胞悬液转移至T25细胞瓶内，补加适量的培养基，轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀，放入温箱内培养。

6）第二天观察细胞贴壁生长情况，换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养，待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代，细胞活力恢复后才能进行后续的实验。

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产品名称	乳腺癌成纤维细胞
规格	5×10⁵Cells/T25培养瓶
货号	BJ-X97524

商品属性：

名称 乳腺癌成纤维细胞

2.组织来源：乳腺癌组织

3.产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

4.细胞简介：

人乳腺癌成纤维细胞分离自患有乳腺癌的女性乳腺组织；女性乳腺是由皮肤、纤维组织、乳腺腺体和脂肪组成的，乳腺癌是发生在乳腺腺上皮组织的恶性肿瘤。乳腺癌中99%发生在女性，男性仅占1%。乳腺并不是维持机体生命活动的重要器官，原位乳腺癌并不致命；但由于乳腺癌细胞丧失了正常细胞的特性，细胞之间连接松散，容易脱落。癌细胞一旦脱落，游离的癌细胞可以随血液或淋巴液播散全身，形成转移，危及生命。目前，乳腺癌已成为威胁女性身心健康的常见肿瘤。成纤维细胞（Fibroblast）是疏松结缔组织的主要细胞成分，由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大，轮廓清楚，多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构，其细胞核呈规则的卵圆形，核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛，细胞质嗜弱碱性，具明显的蛋白质合成和分泌活动，在一定条件下，它可以实现跟纤维细胞的互相转化；成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的乳腺癌成纤维细胞呈圆形、折光性良好，悬浮于培养基中。30min细胞贴壁，其中部分开始伸出伪足，表现为小的突起；6h后细胞基本贴壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布较均匀，散在生长，不聚集成团；细胞生长迅速，5-7天即呈融合状态，细胞排列紧密，有的交叉重叠生长，平坦、胞体较大，细胞质透明，细胞核较大，呈椭圆形，颜色淡。细胞融合，并彼此连接成网状；细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。

5.方法简介：

()实验室分离的人乳腺癌成纤维细胞采用-胶原酶混合消化法结合差速贴壁法制备而来，细胞总量约为5×10?cells/瓶。

6.质量检测：

()实验室分离的人乳腺癌成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

7.培养信息：

培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

产品货号CM-H172

换液频率每2-3天换液一次

生长特性贴壁

细胞形态成纤维细胞样

传代特性可传5代左右；3代以内状态最佳

消化液0.25%

培养条件气相：空气，95%；CO2，5%

细胞培养步骤:

一.培养基及培养冻存条件准备:

1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。

2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。

二. 细胞处理:

1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。

2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

图片13.jpg

细胞培养操作规程：

一．培养基及培养冻存条件准备：

1）准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640：GIBCO，货号21875-091)，90%；优质胎牛血清，10%。

2）培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%。温度：37℃，培养箱湿度为70%-80%。

3）冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配，液氮储存。

二．细胞处理：

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于冻存管盖部）摇晃解冻，移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

对于悬浮细胞，传代可参考以下方法：

方法一：收集细胞，1000RPM，常温条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀，将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

牛免疫球蛋白A(IgA)免疫试剂盒进口、组装

大鼠基质金属蛋白9/明胶B(MMP-9/Gelatinase B) 免疫试剂盒进口、分装

大鼠CD34分子(CD34)免疫试剂盒进口、分装

大肠杆菌显色培养基英文名称：E.Coli Chromogenic Medium 产品规格：1000(ML)

TCBS琼脂英文名称：Thiosulfate Citrate Bile Salts Sucrose Agar 产品规格：250g

麦芽糖英文名称：产品规格：20支

小鼠胰岛素样生长因子结合蛋白2(IGFows\system32\EhStorShell.dll

乳腺癌成纤维细胞Sporothrix schenckii申克孢子细LAMP试剂盒动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次低温负20度一年 2-3周HSP105 热休克蛋白105抗体规格: 0.1mlMouse Anti-Bov IgG/Cy5.5 Cy5.5标记的小鼠抗牛IgG 规格: 0.1ml

Duck Enteritis Virus鸭肠炎病毒探针法荧光定量PCR试剂盒动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次低温负20度一年 2-3周Defensin β2/DEFB2/HBD-2 防御素β2抗体规格: 0.1mlC1orf93 1号染色体开放阅读框93抗体规格: 0.2ml

Classical Swine Fever Virus-Vaccine(CSFV-Vaccine)猪瘟病毒疫苗株探针法荧光定量RT-PCR试剂盒动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次低温负20度一年 2-3周ARRDC3 抑制蛋白结构域蛋白3抗体规格: 0.2mlET-1 内皮素-1抗体规格: 0.2ml

Radix adenophorae南沙参LAMP鉴定试剂盒中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次低温负20度一年 2-4周SNF5 转录调控激活蛋白SNF5抗体规格: 0.2mlCCR-3 细胞表面趋化因子受体3抗体规格: 0.1ml

Calymmatobacterium granulomatis肉芽肿鞘杆LAMP试剂盒动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次低温负20度一年 2-3周phospho-CK18(Ser74) 磷酸化细胞角蛋白18抗体规格: 0.1mlNOS-2/iNOS 氮合成-2抗体（诱导型）规格: 0.1ml

Latino virus(LATV)拉蒂诺病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次低温负20度一年 2-3周MEGF5/Slit3 复合型表皮生因子样结构域蛋白5抗体规格: 0.2mlHistone H3-like protein 组蛋白H3样抗体规格: 0.2ml

Cucumber Mosaic Virus(CMV)黄瓜花叶病毒RT-PCR试剂盒植物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次低温负20度一年 2-3周phospho-ASK1(Ser967) 磷酸化细胞凋亡信号调节激1抗体规格: 0.2mlKLK12 激肽释放12抗体规格: 0.1ml

溶血性链球荧光LAMP试剂盒动物病原微生物检测（科研用） 50次PICK1 蛋白激Cα相互作用蛋白1抗体规格: 0.2mlphospho-Acinus(Ser1180) 磷酸化泡Acinus蛋白抗体 0.1ml

Rickettsia gravesii白垩立克次氏体LAMP试剂盒动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次低温负20度一年 2-3周CD10/CALLA/Neprilysin CD10抗体规格: 0.1mlChloramphenicol 抗体规格: 0.2ml

Bovine Papular Stomatitis Virus(BPSV)牛丘疹性口炎病毒探针法荧光定量PCR试剂盒动物病原微生物检测（科研用）/定做种属检测试剂盒 50次低温负20度一年 2-3周Goat Anti-Mouse IgM/Alexa Fluor 647 Alexa Fluor 647标记的羊抗小鼠IgM 规格: 0.1mlArfaptin 1 ADP核糖基化因子结合蛋白1抗体规格: 0.1ml