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货号 | BJ-X97618 |
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操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
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产品名称 | |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
货号 | BJ-X97618 |
商品属性:
名称 大鼠牙龈成纤维细胞 2.组织来源:牙龈组织 3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介: 大鼠牙龈成纤维细胞分离自牙龈组织;牙龈指紧贴于牙颈周围及邻近的牙槽骨上淡红色的结构,由复层扁平上皮及固有层组成。是口腔黏膜的一部分,血管丰富,呈淡红色,坚韧而有弹性,因缺乏黏膜下层,直接与骨膜紧密相连,故牙龈不能移动。成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分,由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大,轮廓清楚,多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构,其细胞核呈规则的卵圆形,核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛,细胞质嗜弱碱性,具明显的蛋白质合成和分泌活动,在一定条件下,它可以实现跟纤维细胞的互相转化;成纤维细胞对不同程度的细胞变性、坏死和组织缺损的修复有着十分重要的作用。刚分离的表皮成纤维细胞呈圆形、折光性良好,悬浮于培养基中。30min细胞贴壁,其中部分开始伸出伪足,表现为小的突起;6h后细胞基本贴壁*,伸展成梭形,胞核清晰,分布较均匀,散在生长,不聚集成团;细胞生长迅速,5-7天即呈融合状态,细胞排列紧密,有的交叉重叠生长,平坦、胞体较大,细胞质透明,细胞核较大,呈椭圆形,颜色淡。细胞融合,并彼此连接成网状;细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。 5.方法简介: ()实验室分离的大鼠牙龈成纤维细胞采用-胶原酶混合酶消化后差速贴壁制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测: ()实验室分离的大鼠牙龈成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息: 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-R207 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态成纤维细胞样 传代特性可传5代左右;3代以内状态最佳 消化液0.25% 培养条件气相:空气,95%;CO2,5% |
细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
大鼠三碘甲状腺原(T3)免疫试剂盒现货供应
大鼠高敏甲状腺素(u-T4)免疫试剂盒现货供应
鱼乙酰酯(AChE)免疫试剂盒现货供应
M-肠道菌琼脂 英文名称:M-Enterococcus Agar 产品规格:250g
RV沙门菌增菌液体培养基(2015药典) 英文名称:RV Salmonella Enrichment Medium 产品规格:250g
猪载脂蛋白E(Apo-E)免疫试剂盒进口、组装
小鼠血管内皮细胞生长因子B(VEGF-B)免疫试剂盒进口、分装
小鼠骨钙素/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫ows\system32\EhStorShell.dll
大鼠牙龈成纤维细胞Parelaphostrongylus tenius脑膜蠕虫LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周CKIP-1 酪蛋白激2相互作用蛋白1抗体 规格: 0.2ml
Marteilia sydneyi悉尼马尔太虫LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周MYL6 肌球蛋白轻链6抗体 规格: 0.1ml
Crimean-Congo Hemorrhagic Fever Virus(CCHFV )克里米亚-刚果出血热病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周CDCA7L 细胞分裂周期相关蛋白JPO2抗体 规格: 0.2ml
Herba siegesbeckiae豨莶草染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周XRCC3 X射线修复交叉互补蛋白3抗体 规格: 0.2ml
Haemonchus placei柏氏血矛线虫LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周PDX1 胰岛素促进因子抗体(胰十二指肠同源异型盒蛋白) 规格: 0.1ml
Klebsiella oxytoca产酸克雷伯探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周SM Myosin (Smooth Muscle) 人心肌肌凝蛋白(平滑肌) 小鼠单抗 规格: 0.2ml
Rhizoma zingiberis干姜LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周PTEN/MMAC1(CT) 一种瘤抑制基因抗体(C端) 规格: 0.1ml
Naegleria spp.纳氏虫属通用·LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周HRAS/Ras/Ras p21 原基因H-ras抗体 规格: 0.1ml
Mycobacterium scrofulaceum瘰疬分枝杆探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周PKMYT1 髓鞘转录因子1激抗体 规格: 0.1ml
Alternaria triticin小麦叶疫病PCR试剂盒 植物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Rabbit Anti-human IgG/Cy3 Cy3标记的兔抗人IgG 规格: 0.1ml
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