当前位置:上海邦景实业有限公司>>科研细胞>>原代细胞>> 宫颈癌成纤维细胞
货号 | BJ-X97616 |
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细胞培养步骤:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1) 准备DMEM-H培养基(DMEM-H:GIBCO,货号12800017, 添加NaHCO3 1.5g/L),90%;胎牛血清,10%。
2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3) 冻存液:90%*培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二. 细胞处理:
1) 复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入10cm皿中,加入约8ml培养基,培养过夜)。第二天换液并检查细胞密度。
2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
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产品名称 | |
规格 | 5×10⁵Cells/T25培养瓶 |
货号 | BJ-X97616 |
商品属性:
名称 宫颈癌成纤维细胞 2.组织来源:宫颈癌组织 3.产品规格:5×105cells/T25细胞培养瓶 4.细胞简介: 人宫颈癌组织源成纤维细胞分离自患有宫颈癌病人的宫颈癌组织;宫颈癌也称子宫颈癌,指发生在子宫阴道部及宫颈管的恶性肿瘤,是女性常见恶性肿瘤之一,发病率位于女性肿瘤的第二位。宫颈癌可向邻近组织和器官直接蔓延,向下至阴道穹窿及阴道壁,向上可侵犯子宫体,向两侧可侵犯盆腔组织,向前可侵犯膀胱,向后可侵犯直肠。也可通过淋巴管转移至宫颈旁、髂内、髂外、腹股沟淋巴结,晚期甚至可转移到锁骨上及全身其他淋巴结。血行转移比较少见,常见的转移部位是肺、肝及骨。肿瘤微环境即肿瘤细胞生存的外部环境,由不同种类的非肿瘤性的细胞与细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)构成,包括纤维细胞,免疫细胞,内皮细胞,间充质干细胞等,肿瘤细胞通过调控这些间质细胞,创造出有利于自身侵袭转移的条件,从而使得肿瘤得到进展。越来越多的证据表明,肿瘤微环境的改变在肿瘤进展中扮演着重要的角色。在肿瘤微环境中,研究最多也是最主要的间质细胞是肿瘤相关成纤维细胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs)。CAFs 主要由肿瘤周边的正常成纤维细胞和成纤维细胞样细胞演化而来。宫颈癌组织源成纤维细胞多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构,其细胞核呈规则的卵圆形,核仁大而明显。刚分离的宫颈癌组织源成纤维细胞呈圆形、折光性良好,悬浮于培养基中。30min细胞贴壁,其中部分开始伸出伪足,表现为小的突起;6h后细胞基本贴壁*,伸展成梭形,胞核清晰,分布较均匀,散在生长,不聚集成团;细胞生长迅速,5-7天即呈融合状态,细胞排列紧密,有的交叉重叠生长,平坦、胞体较大,细胞质透明,细胞核较大,呈椭圆形,颜色淡。细胞融合,并彼此连接成网状;细胞呈突起的纺锤形或星形的扁平分布。 5.方法简介: ()实验室分离的人宫颈癌成纤维细胞采用混合胶原酶消化法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。 6.质量检测: ()实验室分离的人宫颈癌成纤维细胞经Vimentin免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。 7.培养信息: 培养基含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等 产品货号CM-H207 换液频率每2-3天换液一次 生长特性贴壁 细胞形态成纤维细胞样 传代特性可传5代左右;3代以内状态最佳 消化液0.25% 培养条件气相:空气,95%;CO2,5% |
细胞培养操作规程:
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)准备RPMI-1640培养基(RPMI-1640:GIBCO,货号21875-091),90%;优质胎牛血清,10%。
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37℃,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配,液氮储存。
二.细胞处理:
1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于冻存管盖部)摇晃解冻,移入事先准备好的含有4mL培养基的15ml离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟,弃去上清液,加入1mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液移入含有5ml培养基的培养瓶中培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
对于悬浮细胞,传代可参考以下方法:
方法一:收集细胞,1000RPM,常温条件下离心5分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。
操作要点:
1)将培养基在37℃水浴锅预热;准备一个15mL无菌的离心管,加入8mL预热培养基。
2)将冻存细胞从液氮罐中取出,快速放入37℃水浴锅中复温(可准备一洁净的烧杯,装满37℃的水,细胞冻存管取出后迅速放入烧杯内,再逐步转移到水浴锅中)。轻轻晃动冻存管,使细胞能在1~2min内*解冻,使细胞能尽快通过最易受损的温度段(-5~0℃)。注意冻存管管口不能没入水中,BRL(大鼠肝细胞)避免引起污染。
3)用75%酒精擦拭冻存管后再置于超净台内,将管内细胞转移至准备好的离心管内,轻轻吹打液体,使细胞均匀分散,降低DMSO浓度,吹打时避免产生气泡。用新鲜培养基洗管壁2次,均转移至离心管内。
4)800rpm离心5min,弃上清,加入新鲜的培养基,吹打制成细胞悬液。
5)将细胞悬液转移至T25细胞瓶内,补加适量的培养基,轻轻晃动细胞瓶使细胞分布均匀,放入温箱内培养。
6)第二天观察细胞贴壁生长情况,换新鲜培养基以去除死细胞。继续培养,待细胞长至80~90%汇合时正常传代。一般刚复苏的细胞需经过2~3次传代,细胞活力恢复后才能进行后续的实验。
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检定培养基 英文名称:Test Medium 产品规格:250g
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宫颈癌成纤维细胞Calyx kaki柿蒂染料法PCR鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周phospho-SYN1(Ser553) 磷酸化神经突触素1抗体 规格: 0.1ml
Campylobacter sputorum唾液弯曲杆LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周MRPS4/IMP3 线粒体核糖体蛋白S4抗体 规格: 0.2ml
Fusarium spp.镰刀通用探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周AMPK alpha 1/PRKAA1 苷单磷酸活化蛋白激α1抗体 规格: 0.1ml
Semen sojae preparatum淡豆豉LAMP鉴定试剂盒 中药材鉴定试剂盒/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-4周Beta-HCG/HCG beta 人β亚基人绒毛膜促性激素(β HCG)抗体 规格: 0.1ml
Taylorella spp.泰勒氏通用LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周C-Mer/MERTK c-mer原基因酪激抗体 规格: 0.1ml
Equine Rhinitis Virus马鼻炎病毒探针法荧光定量PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周eIF4EBP1/4EBP1 eIF4E结合蛋白抗体 0.1ml
Sabia Virus(SABV)萨比亚病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Rabbit Anti-horse IgM/HRP 辣根过氧化物标记的兔抗马IgM 规格: 1mg
甲型流感/乙型流感双重RT-PCR试剂盒 定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周FGFR5/FGFRL1 成纤维细胞生因子受体5抗体 规格: 0.1ml
Xenohaliotis californiensis加州立克次体LAMP试剂盒 动物病原微生物检测(科研用)/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周ATF1 活化转录因子1抗体 规格: 0.1ml
马源性成分PCR检测试剂盒 种源性检测/定做种属检测试剂盒 50次 低温 负20度 一年 2-3周Trk B/NTRK2 酪激B抗体 规格: 0.1ml
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