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备试剂与收集血样:
1. 收集标本:血清、血浆(EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测, 2-8 ℃ 保存48 小时;更长时间须冷冻( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反复冻融。
2. 标准品液配制:使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管,管加标本稀释液 900ul ,第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反复作对倍稀释,从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。
3. 10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释( 示例: 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水)。
4. 洗涤液:用重蒸水 1:20 稀释(示例:1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水)
产品名称 | 人雷帕霉素靶蛋白(mTOR)elisa进口试剂盒 |
英文名称 | One target of rapamycin (mTOR) ELISA Kit |
货号 | BJ-G10565 |
规格:96T/48T
特点:灵敏性高、特异性强、重复性好
用途:科研实验等领域科学研究,不得用于临床诊断
运输:快递(根据客户要求,选择具体的运输方式)
试剂盒种属:羊、鸡、鸭、鱼、人、大鼠、小鼠、豚鼠、仓鼠、裸鼠、兔子、猪、犬、猴、马、牛等动植物。
待检样本:体液、血清、血浆、细胞培养上清液、尿液、组织匀浆、心房水标本等等
检测程序:
1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品 100ul ,将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。
2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干。
3. 每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。
样本实验前准备:
ELISA进口试剂盒液体样本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
(1)血清
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(2)血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(3)尿液:
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
(4)细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
(5)培养细胞
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(6)组织标本
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
实验步骤:
石蜡包埋组织切片 3~4μm 厚度
1.烤片: 将待做切片置于切片架上,于 60℃恒温烤箱中至少烤 1 hr;
2.脱蜡: 切片放入盛有二甲苯的容器中脱蜡 3 次(即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ),每次10 min;
3.水化: 切片经下行酒精水化,无水乙醇 5min,95%乙醇 2 次(每次 2min),85%乙醇 2 min;75%乙醇 2min,自来水冲洗,ddH2O 洗 2×2min;
4.抗原修复: 根据抗体说明书推荐方法进行抗原修复,常采用高压、微波(温度达到 98~100℃)或酶消化修复法,室温自然冷却,自来水冲洗,ddH2O 洗 2×2min,TBS 洗涤(2×2min)(具体修复方法见附 1)* 注:有些抗原勿需修复,直接进入第 5 步封闭。
5.封闭: 滴加试剂 B,37℃湿盒孵育 30 min;
6.加一抗:滴加用试剂 C(即用型一抗),37℃湿盒孵育 2 hr 或 4℃过夜;
7.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min);
8.封闭: 滴加试剂 B,37℃湿盒孵育 10 min;
9.加二抗: 滴加用抗体稀释液稀释的生物素化二抗(试剂 D),37℃湿盒中孵育30 min;
10.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min);
11.封闭: 滴加试剂 Tween 20,37℃湿盒孵育封闭 20 min;
12.加 HRP-SA: 滴加用试剂 C 稀释的试剂 E(1:50~200,终浓度 5~20 nM),37℃湿盒中孵育 30 min;
13.洗涤: TBS-T 洗涤(3×5 min),TBS 洗涤(2×5 min);
14.显色:应用 DAB 溶液(试剂 F)显色;
15.复染:自来水充分冲洗,复染,脱水,透明;
16.封片: 待组织标本干后,用试剂缓冲甘油封固剂封片;
17.观察成像: 显微镜下观察成像。
P815小鼠肥大细胞瘤细胞 P815 mouse mastocytoma cell DMEM培养基+10%FBS异丁司特(标准品)质量规格:HPLC>99%,标准品Ibudilast
白细胞介素-10超家族吉西他滨质量规格:>98%,free baseGemcitabine
SF767(人脑瘤细胞) 5×106cells/瓶×2 SHG44(胶质瘤细胞)沙利度胺(反应停)质量规格:>98%Thalidomide
CL-0052Caki-1(人肾透明细胞癌细胞)5×106cells/瓶×2沙利度胺(标准品)质量规格:HPLC>98%,标准品Thalidomide
TNFRSF18 Others Human 人 GI / TNFRSF18 人细胞裂解液 (阳性对照) 乙酰紫堇灵(标准品)质量规格:HPLC≥98%,标准品Acetylcorynoline
MN-c, 小鼠皮质神经元 Mouse藜芦醛shēng huà shì jì容量:100克
T Others Human 人 ansthyretin / T / Prealbumin / PALB 人细胞裂解液 (阳性对照) 三溴酚 2,4,6-Tribromophqnol 118-79-6
人脐静脉平滑肌细胞cDNAHUVSMC cDNA西蒙氏柠檬酸盐培养基shēng huà shì jì容量:2~8℃50毫升
TSPAN8 Others Human 人 TSPAN8 / Teaspanin 8 / TM4SF3 人细胞裂解液 (阳性对照) 甲基-β-环糊精shēng huà shì jì容量:100克
大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞(低分化);PC-12(低分化)135-55-72-羟基-7-磺酸钠wo7ium 2-naphthol-7-sulfonate
HA Others H8N4 甲型流感 H8N4 (A/piail duck/Alberta/114/1979) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人细胞裂解液 (阳性对照) D-MANNOSED-甘露糖高级
Hep G2, 人肝癌细胞系2-安基本酚 2-cminophqnol 92-22-6
CD3D & CD3E Others Mouse 小鼠 CD3D & CD3E Heterodimer 人细胞裂解液 (阳性对照) M9MEDIUMBROTH,POWDERM9培养基肉汤生物技术级500GRT
人胚肾上皮细胞系;KiMA细胞色素C1克RT
KP-N-NS细胞,人肾上腺神经母细胞瘤细胞(脑转移) 小鼠骨髓瘤细胞,P3/NSI/1-Ag4-1[NS-1]细胞 CL-0397NCI-H23(人非小细胞肺癌细胞)5×106cells/瓶×213922-41-31-基硼酸1-Naphthylboronic acid
人雷帕霉素靶蛋白(mTOR)elisa进口试剂盒大鼠肺血管平滑肌细胞*培养基 100mL苔酚葡萄糖苷;地衣二醇葡萄糖苷(标准品)Orcinol glucosid质量规格:HPLC≥97%,标准品
C6/36细胞,蚊子细胞 A-704(人肾癌细胞) 非洲绿猴肾细胞系/HCV-NS5A;Vero-HCV-NS5A短葶山麦冬皂苷C(标准品)Liriope muscari baily saponins C质量规格:HPLC≥98%,标准品
NRG1 Protein Canine 重组狗 NRG1-alpha 蛋白 (ECD)百两金素A(标准品)Ardisiacrispin A质量规格:HPLC≥98%,标准品
L-O2(人正常肝细胞) 5×106cells/瓶×2 角膜上皮细胞Many types of cells包装:5 × 105方(1ml)柳穿鱼黄素(标准品)Pectolinarigenin质量规格:HPLC≥98%,标准品
肾系膜细胞培养基MCM-prf瓜子金皂苷己(标准品)Polygalasaponin F质量规格:HPLC≥98%,标准品
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