当前位置:上海抚生实业有限公司>>技术文章>>细菌转化实验次序
细菌转化指某一受体细菌通过直接吸收来自另一供体细菌的含有特定基因的脱氧核糖核酸(DNA)片段,从而获得了供体细菌的相应遗传性状,这种现象称为细菌转化。自然界的转化现象,一般发生在同一物种或近缘物种中。细菌转化方法已被引入其他生物,例如采用原生质体转化法,可将外源DNA注入到不具摄取DNA能力的生物中,使其获得某些新的特性。
实验步骤
1. 准备平板: 每组:1块LB平板,2块LB/amp平板,1块LB/amp/ara平板
2. 准备感受态细胞:用250μl无菌水或转化液悬浮试剂盒中提供的大肠杆菌菌粉,此即感受态细胞。
3. 活化受体细胞:挑取1环E.coli K12 HB101菌液,于LB培养基上37℃活化16-24h。
4. 转化:1)在两只无菌离心管上分别标 记+DNA, -DNA。 2)在上述两管中分别加入 250μl转化液。 3) 迅速置于冰上。 4)各挑取活化好的受体菌的一 个单菌落,悬浮于两管转化液中。 5)在标有+DNA的管中加入一 环质粒DNA,而标有-DNA的管中不加。 6)细菌转化将上述两管于冰上放置10min。7)在准备好的培养基底部如左图。
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