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荧光标记抗体注意事项:
1)对荧光标记的抗体的稀释,要保证抗体的蛋白有一定的浓度,一般稀释度不应超过1:20。
2)染色的温度和时间需要根据各种不同的标本及抗原而变化,染色时间可以从10 min到数小时,一般30 min已足够。
3)为了保证荧光染色的正确性,*试验时需设置下述对照:
① 标本自发荧光对照:标本加1-2滴0.01mol/L,pH7.4的PBS。
② 特异性对照(抑制试验):标本加未标记的特异性抗体,再加荧光标记的特异性抗体。
③ 阳性对照:已知的阳性标本加荧光标记的特异性抗体。
4)一般标本在高压汞灯下照射超过3min,就有荧光减弱现象,经荧光染色的标本应在当天观察。
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