小鼠胚胎成骨细胞前体细胞原代培养

时间：2023/3/20阅读：282

小鼠胚胎成骨细胞前体细胞原代培养：

1、取约500mg脂肪组织（自外科手术患者的皮下获取），再将脂肪组织一次挤压进入准备好的15m离心管中，每个离心管中的组织不超过5ml。

2、吸取缓冲液PBS7ml加入到上述装有组织的离心管中，用吸管吹打10~20次，然后静置1min左右，用吸管将组织下层的液体吸出。如此反复直到所吸出的液体呈透明状，不带有血细胞为止。

3、向有的试管中加入与组织量相同大约5ml左右的消化液（yi酶0.25%，I型胶原酶0.1%以1：1比例混合配制而成），将试管密封，放入37°C恒温摇床中，190r/min，震荡消化30min。此时液面分为3层，上层为黄色油状脂肪细胞层，中层为脂肪组织层，下层为含单个核细胞的液体；

4、吸出离心管中的下层液体移入含*培养基（含10%胎牛血清的高糖DMEM）的新离心管中终止消化，然后将离心管封闭，1500rpm离心10min。

5、用吸管吸取上清后去掉，加入1ml培养基，轻轻吹打10~20次制成细胞悬液，将各个离心管中的胞悬液收集起来，接种待用。

6、在剩余脂肪中加入新的yi酶和胶原酶，重复以上步骤继续消化，重复2-3次，将收集到的有核细胞按照一定的密度接种到培养瓶中，放入37°C、5% CO2培养箱培养；

7、次换液：大约12-24小时后，观察细胞贴壁即可进行次换液，此后每隔3天换液，待细胞生长至融合后进行传代。

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