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200次测定大分子量物质的夹心法ELISA,标准曲线的范围一般较宽,曲线高点的吸光度可接近2.0,绘制时常用半对数纸,以检测物的浓度为横坐标,ELSIA试剂盒以吸光度为纵坐标,将各浓度的值逐点连接,所得曲线一般呈S形,其头、尾部曲线趋于平坦,中央较呈直线的部分是理想的检测。 VEGT-Delisa试剂盒而非特异IgM由于其在*步温育中,可与特异IgM竞争与固相抗体结合,所以会影响测定的灵敏度。因此,使用本法测IgM,必须对临床样本进行适当稀释。样本稀释后,上述产生干扰作用的非特异IgM含量减少,而特异IgM由于处于相应病原体的急染期,滴度很高,一定稀释后,不会有明显影响。
VEGT-Delisa试剂盒的分析
1.首先将抗人IgMbt链抗体于碳酸盐缓冲液中40c下过夜包被聚苯乙烯等固相,形成固相抗体,洗涤去除未与固相结合或结合不紧的抗体后,用小牛血清或牛血清白蛋白等封闭,洗涤去除未结合的部分及杂质。
2.加入含待测IgM抗体的临床样本如血清等,温育一定时间后洗板;此时,大鼠ELISA试剂盒待测样本中的IgM抗体就会与固相上的抗P链抗体反应而吸附于固相上。
3.加入特异的抗原如HAV抗原、HBcAg等,温育一定时间后洗板;此时,特异抗原就会与固相上的特异IgM抗体发生反应。
4.加入酶标记的抗特异抗原的抗体,温育一定时间后洗板;此时,在固相上即形成相应的抗原抗体复合物。
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