人脑红蛋白 ELISA试剂盒关键步骤和样本处理及要求

人脑红蛋白 ELISA试剂盒

ELISA关键步骤为以下几点:
1、尽量用八道或者十二道移液器加样。对于相同的试剂，经如二抗，酶，显色液，终止液等。
2、自己的样品，因为每一孔的样品不一样，用排枪加有些麻烦，如果一次的样品比较少，而自己加样又比较快，可以一个孔一个孔的加，但如果想一次把96或者48T的做完，可以先摆好一些PCR管或者准备一个96孔细胞培养板。将自己的样品先加到PCR管或者培养板中（此板间距与酶板板相同）。记得加一定的余量，如一次加样是50ul，可以先加70ul。加完后再用排枪加样，这样可以缩短加样时间，减小每个孔间的时间误差。
3、如果有多余的孔，标准品孔可以做复孔，在自己的样品前加一次标准品，加完样品后再加一次标准品。如果孔不够，那么可以将标准品放在样品中间加。

样本处理及要求：
1. 血清：室温血液自然凝固10-20分钟，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。
2. 血浆：应根据标本的要求选择EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次离心。
3. 尿液：用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。
4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。
5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分。离心20分钟左右（2000-3000转/分）。仔细收集上清。分装后一份待检测，其余冷冻备用。
6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.
7. 不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。